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目的：探讨多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme，GBM)细胞中06甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因的甲基化和错配修复(mismatch repair，MMR)基因的表达在介导替莫唑胺(temozolomide，TMZ)耐药中的作用。
方法：用分步诱导法在体外建立耐TMZ不同浓度，不同天数GBM细胞T98G、LN18（0mmol/L，0天；0.4mmol/L，15天，35天和70天；0.8mmol/L，35天）和RG（0mmol/L，O天；0.2mmol/L，100天）。主要采用MTT方法检测TMZ对所建立的耐药株细胞系的半数抑制浓度(IC50)；利用RT-PCR方法在mRNA水平上检测五种MMR基因即MSH2基因、PMS2基因、MSH6基因、MLH1基因和PMS1基因的表达变化；利用甲基化特异性PCR(MSP)方法在DNA水平上检测MGMT基因的甲基化状态；利用Western Blotting方法在蛋白水平上检测MGMT蛋白的表达情况。
结果：MSP结果显示：T98G细胞和LN18细胞中MGMT基因是部分甲基化的，而其余细胞中MGMT基因是完全甲基化的。在对照组和耐药组细胞中MGMT基因甲基化状态没有发生明显的变化，且耐药组内不同浓度不同天数的耐药株细胞中MGMT基因甲基化状态也无明显的变化趋势；Western Blotting结果显示：T98G细胞和LN18细胞有MGMT蛋白的表达，其余四种细胞没有MGMT蛋白的表达，对T98G耐药株细胞和LN18耐药株细胞而言，对照组细胞和耐药组细胞中MGMT蛋白没有发生明显变化，而且耐药组内的耐药株细胞中MGMT蛋白也无随着加药浓度和天数增加而变化的趋势，RG耐药株细胞中MGMT蛋白表达依然是阴性；MTT结果显示：经TMZ作用96小时后，耐药株细胞的耐药程度明显增强：对T98G耐药株细胞、LN18耐药株细胞和RG耐药株细胞而言，T98G+0.4mmol/L(70天)和T98G+0.8mmol/L（35天）对TMZ的敏感性下降了，其IC50由0.8mmol/L±0.49mmol/L（0mmol/L，0天）分别增高为1.1mmol/L±1.87mmol/L和1.25mmol/L±5.66mmol/L;同样的情况也发生在LN18耐药株细胞和RG耐药株细胞中，其IC50由0.3mmol/L±0.09mmol/L(0mmol/L，0天)分别增至1.25mmol/L±1.41mmol/L（0.4mmol/L，70天）和1.3mmol/L±5.65mmol/L（0.8mmol/L，35天）以及由0.24mmol/L±7.9mmol/L（0mmol/L，O天）增至1.1mmol/L±3.89mmol/L（0.2mmol/L，100天）；RT-PCR结果显示：T98G耐药株细胞和LN18耐药株细胞的MMR基因中的MSH2基因、PMS2基因和MSH6基因的表达减少，且在高浓度和天数多时更为明显，尤以MSH6基因变化最大。其他的MMR基因如PMS1基因和MLH1基因无明显变化，RG耐药株细胞的五种MMR基因均无明显变化。
结论：成功地在体外诱导了耐TMZ不同浓度的T98G耐药株细胞和LN18耐药株细胞各两株，RG耐药株细胞一株。T98G细胞和LN18细胞及其耐药株细胞中MGMT基因的甲基化状态没有发生明显的变化，而MSH2基因、PMS2基因和MSH6基因的表达量随着加药浓度和天数的增加变少，其他的PMS1基因和MLH1基因以及RG耐药株细胞的MMR基因的表达没有明显的变化。