G4 DNA折叠及RecQ5β对不同DNA解旋的动理学研究

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G4结构是人类端粒末端存在的一种特殊的DNA二级结构,其折叠动理学对它们的生物学功能,如在端粒稳定性的保持和染色体末端的保护等方面,都有非常重要的影响。G4结构种类很多,受到环境因素的影响非常大,如离子种类、溶液的拥挤程度等。  在本工作中,我们主要研究了G4DNA在不同的单价阳离子环境中的折叠动理学,并测定了Na+和K+诱导的G4折叠的具体的动理学参数,和G4从Na+条件下的反平行-篮式构型,到K+条件下的杂交构型的结构变化时的动理学过程。更有趣的是,虽然在以前的关于G4折叠的实验研究中,Li+经常被用作对照实验以提供类似的离子环境,其对Na+或K+条件下的G4折叠的协同作用并没有被考虑进去,但是,我们发现,Li+确实能够显著地、以不同的方式影响到Na+和K+诱导的G4折叠的动理学过程,例如,Li+可以改变Na+诱导的G4折叠的比例,并且很大程度地提高K+诱导的G4折叠的速率。我们现在的工作可以对单价阳离子对G4折叠动理学产生的影响进行新的阐述,并且应该会对未来G4潜在的折叠机制方面的研究有一定帮助。  RecQ5β解旋酶是人类体内存在的一种必不可少的RecQ解旋酶,它能够在DNA复制、DNA修复、DNA重组和RNA转录等过程中发挥非常重要的作用。到目前为止,我们对RecQ5β解旋酶的解旋活性和底物特异性方面的研究一直没有取得很大进展。  在本研究工作中,我们使用快速停流方法测量了RecQ5β解旋酶对不同结构的DNA底物的解旋动理学和解离动理学。我们发现,RecQ5β解旋酶可以高效地解旋单双链DNA、岔口DNA和霍利迪连结体DNA,但其解旋平末端DNA和G4结构DNA的效率却很低。RecQ5β解旋酶的这种解旋底物特异性很可能与DNA底物具有的交叉位点有关,RecQ5β解旋酶与交叉位点的结合应该非常紧密,并且能够很好地促进自身解旋活性的提高。而且,从全长型RecQ5βfl与截断型RecQ5β1-467的解旋和解离动理学的比较中,我们可以看出,C-末端结构域可能会强烈影响RecQ5β的解旋活性和与DNA底物的结合亲和力。这些结论可能会对进一步阐明RecQ5β解旋酶的生理功能和工作机理有很大帮助。
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