论文部分内容阅读
研究背景： 过去三十年，我国肺癌患者死亡率大幅度攀升。未来十年，我国肺癌病人数可能成为世界第一，肺癌的预防和治疗刻不容缓。传统上肺癌的治疗分为：化学治疗、放射治疗和外科治疗。其中，化疗为90％以上肺癌患者需接受的治疗方法，临床上顺铂是最常用的化疗药物。近年以来，随着受体化疗耐药性的增强，铂类化疗效果不理想。故寻找高效、低毒的药物来联合顺铂以增强化疗效果。 本文选取海洋藻毒素岗田酸与传统老药顺铂，探讨两药单独及联合对人肺腺癌A549细胞增殖的影响，分析两药相互作用关系并初步探究诱导细胞凋亡的机制，以期为寻找临床化疗调节剂提供新的理论依据。 研究方法： 1．MTT法检测细胞增殖抑制率，分析顺铂、岗田酸及两药联合对A549细胞增殖的影响。金正均公式分析岗田酸与顺铂两药在抑制A549细胞增殖上的相互关系。 2．台盼蓝拒染实验进行活细胞数量的测定，透射电镜观察、倒置相差显微镜观察、Giemsa染色法、吖啶橙染色法观察药物对A549细胞形态学影响。 3．琼脂糖凝胶电泳法、考马斯亮蓝G250染色法检测药物对A549细胞遗传物质DNA和胞内蛋白的影响。 4．荧光分光光度法测定ROS含量和线粒体去极化，倒置相差荧光显微镜观察线粒体膜电位变化，MTT检测外源Ca2+对药物处理下A549细胞存活率的影响。 研究结果： 1.MTT实验结果显示：一定浓度范围内，岗田酸和顺铂对A549细胞的增殖均存在抑制作用，抑制作用随着时间延长和剂量升高而加强。双药联合对细胞增殖产生抑制，抑制效果好于单药作用，联合作用也呈现出时间和剂量依赖性抑制。金正均公式计算结果显示：岗田酸联合顺铂处理A549细胞，岗田酸与顺铂表现出相加或协同的作用效果。 2.台盼蓝拒染实验结果显示：经20ng/ml岗田酸、1μg/ml顺铂、20ng/ml岗田酸+1μg/ml顺铂处理A549细胞后，活细胞数目呈现时间依赖性减少，双药联合作用效果明显好于单药。形态学观察结果显示：20ng/ml岗田酸、1μg/ml顺铂、20ng/ml岗田酸+1μg/ml顺铂处理A549细胞48h后，细胞间接触消失，细胞形态变圆，细胞体积缩小，细胞内染色质凝集，细胞空泡化严重，细胞周围密布凋亡小体、部分细胞破碎解体，双药联合细胞凋亡现象比单药更严重。 3.琼脂糖凝胶电泳结果显示：20ng/ml岗田酸、1μg/ml顺铂、20ng/ml岗田酸+1μg/ml顺铂处理A549细胞48h后，DNA受损出现阶梯状光亮条带，联合处理组DNA条带更长、更亮，说明药物作用下A549细胞发生凋亡。考马斯亮蓝G250染色结果显示：药物作用下A549细胞内总蛋白含量降低，药物联合处理组蛋白含量是低于顺铂处理组和岗田酸处理组，联合处理组与对照相比具有显著性差异。 4.药物引起A549细胞凋亡可能是通过ROS、Ca2+、线粒体参与的胞内信号通路。实验结果显示：药物作用下细胞内ROS含量升高，添加外源Ca2+能加剧细胞凋亡，线粒体膜电位有显著性的变化。