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前言应激这一概念最初由内分泌学家H. Selye在20世纪30年代提出,是指机体在受到各种内外环境因素刺激时所出现的非特异性全身反应,可以由不同的生理、心理及综合因素引起。应激可诱导机体心血管系统、中枢神经系统、免疫系统等的变化,严重时可发生疾病甚至引起死亡。近年来,随着社会发展、环境变化、生活节奏加快,应激已成为威胁人类健康的不可忽视的因素。以往一直认为,应激损害机体的免疫功能,但现有研究表明,慢性应激具有免疫抑制作用,而短期急性应激可以促进免疫功能和健康,并且这种保护作用部分归因于应激激素对免疫细胞迁移的影响。急性应激时人外周血中NK细胞的数量迅速增加,源自于机体各种NK细胞池中NK细胞的释放,但有关应激是通过何种途径影响NK细胞此种再分布的报道较少。为此,我们检测了去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对NK92-MI细胞迁移及趋化因子受体表达的影响,以研究应激引起NK细胞再分布的可能机制。材料和方法1、Transwell法检测不同浓度NE (5×10-12M、5×10-10M、5×10-9M、5×10-8M、5×10-6M)对NK92-MI细胞迁移的影响。2、不同浓度NE (5×10-12M、5×10-10M、5×10-9M、5×10-8M)处理NK92-MI细胞20分钟、40分钟、1小时、2小时、4小时。Real-Time PCR检测各实验组趋化因子受体CCR5、CCR7、CXCR3、CXCR4、CX3CR1 mRNA的表达水平,并检测加入β-肾上腺素能受体阻滞剂普萘洛尔后趋化因子受体mRNA的表达水平。3、不同浓度NE (5×10-10M、5×10-9M、5×10-8M、)处理NK92-MI细胞1小时。流式细胞术检测各实验组NK92-MI细胞表面趋化因子受体CCR5的表达情况。4、MTT法测定不同浓度NE处理1小时对NK92-MI细胞杀伤活性的影响。结果1、高浓度的NE (5×10-6M、5×10-8M、5×10-9M)对NK92-MI细胞的迁移有明显的促进作用(P<0.05),随着NE浓度的降低,这种促进作用逐渐减弱甚至消失。2、Real-Time PCR法检测到五种趋化因子受体中CCR5和CX3CR1 mRNA的变化明显且变化趋势较一致。各处理组中以5×10-9M浓度作用最为明显,当该浓度NE处理NK92-MI细胞1小时后,CCR5和CX3CR1 mRNA表达最高。5×10-7M普萘洛尔能阻断5×10-9M NE的促表达作用。3、流式检测结果表明,NK92-MI细胞表面无CCR5的表达。4、效靶比为4：1时,高浓度的NE (5×10-5M、5×10-6M)对NK92-MI细胞的杀伤活性具有明显的抑制作用(P<0.05),其余浓度的NE (5×10-7M、5×10-8M、5×10-9M、5×10-10M、5×10-11M、5×10-12M)虽然能降低NK92-MI细胞的杀伤活性,但与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论应激浓度的NE可以直接促进NK92-MI细胞迁移,并且对其杀伤活性无明显的抑制作用。应激浓度的NE作用1小时可以显著增加趋化因子受体CCR5和CX3CR1 mRNA表达,而这种促表达作用可被非选择性β-肾上腺素能受体阻滞剂普萘洛尔阻断。在NK92-MI细胞表面没有检测到趋化因子受体CCR5的表达。