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目的:探究Reelin-dab1信号转导通路在铝致Aβ异常生成过程中的作用及其机制,为进一步研究铝的神经毒性机制及其在AD发生发展过程中的机制提供理论参考。方法:1、铝神经毒性细胞模型制备分别以终浓度为0μM、50μM、100μM、200μM和400μM Al(mal)3染毒分化型肾上腺嗜铬细胞瘤(Pheochromocytoma,PC12)细胞12 h、24 h和48 h,采用倒置显微镜观察PC12细胞形态;采用CCK-8法检测PC12细胞活性,确定Al(mal)3制备铝神经毒性细胞模型的染毒剂量和染毒时间。2、Reelin表达改变在铝致PC12细胞Aβ产生异常中的作用采用CCK-8法测定不同浓度的reelin特异性拮抗剂链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)和激动剂皮质酮处理PC12细胞不同时间的细胞活性,确定两者的最佳处理浓度和处理时间。将PC12细胞分为0μM Al(mal)3(对照组)、200μM Al(mal)3染毒组、100μM STZ处理组、100μM STZ+200μM Al(mal)3处理组、1μM皮质酮处理组和1μM皮质酮+200μM Al(mal)3处理组,分别培养12 h、24 h和48 h后,采用倒置显微镜观察PC12细胞形态;采用q RT-PCR检测PC12细胞reelin和dab1基因表达;采用Western-blot法检测PC12细胞reelin和dab1蛋白表达;采用ELISA测定PC12细胞pdab1、Aβ42和Aβ40蛋白表达;采用流式细胞术检测PC12细胞内游离钙离子荧光强度[Ca2+]i。3、Dab1表达改变在铝致PC12细胞Aβ产生异常中的作用采用CCK-8法测定不同浓度的dab1特异性拮抗剂朊病毒肽(Prion peptide,Pr P)和激动剂氯氰菊酯处理PC12细胞不同时间的细胞活性,确定两者的最佳处理浓度和处理时间。将生长状态良好的PC12细胞随机分成:0μM Al(mal)3(对照组)、200μM Al(mal)3染毒组、100μM Pr P处理组、100μM Pr P+200μM Al(mal)3处理组、20μM氯氰菊酯处理组和20μM氯氰菊酯+200μM Al(mal)3处理组,分别培养12 h、24 h和48 h后,观察PC12细胞形态和细胞活性;检测PC12细胞dab1基因和蛋白表达;测定PC12细胞pdab1、Aβ42和Aβ40蛋白表达;检测PC12细胞内游离钙离子荧光强度[Ca2+]i,所用方法同上。结果:1、随着Al(mal)3染毒剂量和染毒时间的增加,PC12细胞活性均呈逐渐下降趋势。与对照组相比,200μM和400μM Al(mal)3染毒组PC12细胞活性明显降低(P<0.05),但400μM Al(mal)3染毒PC12细胞48 h,细胞抑制率太高(抑制率为69.218%),故选取200μM Al(mal)3进行后续实验。2、Reelin表达改变在铝致PC12细胞Aβ产生异常中的作用(1)200μM Al(mal)3染毒PC12细胞12 h、24 h和48 h,可使其reelin m RNA、reelin 330 k Da蛋白片段表达显著低于对照组(P<0.05),且处理PC12细胞12 h,可使其reelin 180 k Da蛋白片段表达显著低于对照组(P<0.05)。与200μM Al(mal)3染毒组相比,100μM STZ+200μM Al(mal)3处理PC12细胞12 h、24 h和48 h,可使PC12细胞reelin m RNA表达显著降低(P<0.05)。100μM STZ+200μM Al(mal)3处理PC12细胞24 h,可使其reelin 330 k Da蛋白片段表达显著低于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05)。100μM STZ+200μM Al(mal)3处理PC12细胞12 h和24 h,虽可使PC12细胞reelin 180 k Da蛋白片段表达降低,但与200μM Al(mal)3染毒组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。200μM Al(mal)3染毒PC12细胞12 h、24 h和48 h,可使其Aβ42蛋白表达显著高于相同染毒时间的对照组(P<0.05),而PC12细胞Aβ40蛋白表达则显著低于相同染毒时间的对照组(P<0.05)。与200μM Al(mal)3染毒组相比,100μM STZ+200μM Al(mal)3处理PC12细胞12 h、24 h和48 h,PC12细胞Aβ42蛋白表达均显著升高(P<0.05),而同一染毒时间点PC12细胞Aβ40蛋白表达显著低于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05)。(2)1μM皮质酮+200μM Al(mal)3处理PC12细胞12 h和24 h,可使其reelin m RNA表达显著高于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05),且处理PC12细胞48 h,可使其reelin m RNA表达显著低于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05)。1μM皮质酮+200μM Al(mal)3处理PC12细胞48 h,可使其reelin 180 k Da蛋白片段表达显著低于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05)。1μM皮质酮+200μM Al(mal)3处理PC12细胞24 h,虽可使PC12细胞reelin 330 k Da蛋白片段表达升高,但与200μM Al(mal)3染毒组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。1μM皮质酮+200μM Al(mal)3处理PC12细胞12 h和24 h,PC12细胞Aβ42蛋白表达显著低于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05),而同一染毒时间点PC12细胞Aβ40蛋白表达显著高于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05)。1μM皮质酮+200μM Al(mal)3处理PC12细胞48 h,可使其Aβ42蛋白表达显著高于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05),而相同染毒时间点PC12细胞Aβ40蛋白表达低于200μM Al(mal)3染毒组(P>0.05)。3、Dab1表达改变在铝致PC12细胞Aβ产生异常中的作用(1)200μM Al(mal)3染毒PC12细胞24 h和48 h,可使其dab1 m RNA和蛋白表达显著低于相同染毒时间的对照组(P<0.05)。100μM Pr P+200μM Al(mal)3处理PC12细胞12 h、24 h和48 h,均可使PC12细胞dab1 m RNA和蛋白表达显著低于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05)。200μM Al(mal)3染毒PC12细胞12 h、24 h和48 h,可使其Aβ42蛋白表达显著高于相同染毒时间的对照组(P<0.05)。200μM Al(mal)3染毒PC12细胞24 h和48h,PC12细胞Aβ40蛋白表达显著低于相同染毒时间的对照组(P<0.05)。100μM Pr P+200μM Al(mal)3处理PC12细胞24 h和48 h,PC12细胞Aβ42蛋白表达显著高于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05),而同一染毒时间点PC12细胞Aβ40蛋白表达显著低于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05)。(2)20μM氯氰菊酯处理PC12细胞12 h、24 h和48 h,可使其dab1 m RNA和蛋白表达显著高于相同染毒时间的对照组(P<0.05)。20μM氯氰菊酯+200μM Al(mal)3处理PC12细胞12 h和48 h,PC12细胞dab1 m RNA和蛋白表达均显著高于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05)。20μM氯氰菊酯+200μM Al(mal)3处理PC12细胞12 h和24 h,PC12细胞Aβ42蛋白表达显著低于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05)。20μM氯氰菊酯+200μM Al(mal)3处理PC12细胞12 h、24 h和48 h,PC12细胞Aβ40蛋白表达显著高于200μM Al(mal)3染毒组(P<0.05)。结论:1、铝暴露可导致PC12细胞Aβ代谢异常。2、Reelin和dab1表达改变会影响Reelin-dab1信号转导,Reelin-dab1信号转导通路参与了铝致神经元Aβ代谢异常的调控。