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乙型肝炎病毒基因组剪接变异体(spliced variants ofhepatitis B virus genomes)是一大类基因部分缺失的亚基因组DNA，由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)前基因组RNA(pregenomic RNA，pgRNA)经剪接并逆转录产生<[1]>。在已经分离到的HBV剪接变异体中，长度约为2．2kb的剪接变异体占80％<[2]>，此类变异体主要分为单剪接与双剪接两种类型。研究显示这两种HBV基因组剪接变异体编码的剪接特异性新蛋白与病毒的持续性感染及致病性相关[3,4]>，但其确切的致病机制迄今不明。本研究通过人类基因表达谱芯片研究分析这两种剪接特异性新蛋白对Huh7肝细胞基因表达的影响，探寻它们可能的致病机制。
本研究第一部分旨在构建剪接特异性新蛋白真核表达载体，并证实其在肝细胞中的表达。为此将剪接特异性新蛋白编码区克隆到真核表达载体pcDNA3.1/HisC，获得重组载体pcDNA3.1/HisC-TPds(双剪接型)、pcDNA3.1/HisC-TPss(单剪接型)，瞬时转染Huh7肝细胞，以Anti-Xpress抗体进行Western Blot检测融合蛋白，证实剪接特异性新蛋白可在Huh7肝细胞中表达。
本研究第二部分以pcDNA3.1/HisC、pcDNA3.1/HisC-TPds、pcDNA3.1/HisC-TPss分别瞬时转染Huh7肝细胞，提取转染细胞总RNA，进行人类基因表达谱芯片分析。同时以半定量RT-PCR验证芯片结果。芯片分析显示：2.2kb HBV基因组剪接变异体剪接特异性新蛋白可能从干扰肝细胞骨架的重塑、细胞内物质代谢等方面引起肝细胞的增生、迁移及代谢异常，促进肿瘤的发生。