宫颈鳞癌组织转移相关基因筛查的初步研究

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目的:应用基因芯片检测盆腔淋巴结转移组和无转移组宫颈鳞癌组织中差异表达基因,从中筛选转移相关基因,为预测宫颈鳞癌转移提供有用的分子标志物,为阐明宫颈鳞癌转移的机制提供线索。方法:1.收集在我院行广泛子宫切除+盆腔淋巴结清扫术的宫颈鳞癌患者癌组织标本,其中盆腔淋巴结转移组4例,无转移组6例。2.抽提各宫颈鳞癌组织总RNA,逆转录合成cDNA,利用罗氏NimbleGen全基因组表达谱芯片筛选盆腔淋巴结转移组及无转移组差异表达基因,得出两组差异表达基因谱。3.从差异表达基因谱中选取6个基因,在盆腔淋巴结转移组及无转移组宫颈鳞癌组织中进行实时荧光定量PCR检测,以公式2-ΔΔCt=2-ΔCt转移组/2-ΔCt无转移组计算各基因表达差异倍数,与基因芯片结果对比,以评估基因芯片准确性。4.通过基因库检索及PUBMED文献搜索结合GO(gene ontology)分类,从差异表达基因谱中筛选出与肿瘤转移相关基因。结果:1.差异基因筛选:通过基因芯片在盆腔淋巴结转移组及无转移组宫颈鳞癌组织中筛选出表达差异明显的基因329个,其中在淋巴结转移组宫颈鳞癌组织中相对于无转移组上调基因有187个,下调基因有142个。2.实时荧光定量PCR验证结果:在两组宫颈鳞癌组织基因芯片筛选出的差异表达基因中,选取KLK6、FGA、CTGF、CPB2、PRL1及CCL20进一步行实时荧光定量PCR检测,计算出差异表达倍数,在盆腔淋巴结转移组中分别为上调2.7014倍、11.7411倍、3.4248倍、12.1232倍、4.4272及下调12.7065倍。这些基因的差异表达趋势与基因芯片结果一致。3.筛选肿瘤相关基因:通过基因库及PUBMED文献检索各基因功能并结合GO分类,从差异表达基因中筛选出与肿瘤转移相关的基因共44个,其中在盆腔淋巴结转移组宫颈鳞癌组织中上调的基因29个,下调的基因15个。结论:1.经基因芯片筛选,并通过实时荧光定量PCR验证,初步建立了宫颈鳞癌组织转移相关差异基因表达谱。2.在宫颈鳞癌差异表达基因谱中,存在多种肿瘤相关基因,说明宫颈鳞癌的转移过程受到多基因调控。
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