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目的： 将基于磁珠的液相免疫检测与电阻抗技术有机融合，解决传统电化学检测中生物活化电极作为耗材所带来的成本高、稳定性差、集成度低等问题。预期建立以生物活化磁珠作为液相均质检测系统、以电化学敏感电极作为定量分析系统、以流路系统进行自动化衔接的基于磁珠液相免疫反应的电化学系统，从而为实现POCT检测的自动化奠定基础，在此基础上将其应用于肠出血性大肠杆菌O157∶H7、沙门氏菌等食源性致病微生物的检测以及人心肌肌钙蛋白Ⅰ等临床检验项目的检测，从而对检测性能进行全面评价。 方法： 1.酶促反应检测体系探索优化:对碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶及其酶促电化学底物进行筛选优化，以获得稳定、高催化产率、高电化学活性的产物; 2.磁珠液相免疫检测系统建立:以磁珠作为液相分散的检测载体，在磁珠表面共价偶联标记抗体，通过优化抗体标记量及标记过程，获得最优的标记效率，将标记有抗体的磁珠用于双抗体夹心法捕获抗原，同时优化磁珠大小及磁珠用量等实验因素; 3.电阻抗定量分析系统建立:根据酶促产物的电化学特性，对电化学敏感电极的结构（平面电极和叉指电级）及测量参数（直流偏置）进行优化，获得兼顾稳定性与敏感性的电极和测量参数，用于酶促产物的阻抗测量; 4.系统集成及其应用与性能评价:将阻抗系统与磁珠液相免疫检测系统有机结合，用于肠出血性大肠杆菌O157∶H7和人心肌肌钙蛋白Ⅰ的检测。 结果： 1.碱性磷酸酶是一种脱磷酸酶，由于磷酸根离子的存在，导致酶催化前后溶液的阻抗值变化不明显，不适用于阻抗定量测量系统;而辣根过氧化物酶具有氧化还原能力，酶催化过程中发生电子得失，释放离子，导致酶催化前后溶液的阻抗值发生变化，因此适用于阻抗定量测量系统。实验结果表明，酶催化后溶液的阻抗值下降。 2.采用EDC/NHS法将抗体共价偶联到带有羧基的磁珠表面，磁珠与抗体的用量比为5∶1时标记效果最佳;双抗体夹心法检测大肠杆菌O157∶H7时，磁珠用量为1 mg/mL时的捕获率最高;0.301μm、0.93μm和1.9μm三种粒径的磁珠在双抗体夹心检测大肠杆菌O157∶H7时，0.93μm的磁珠检测效果最好。 3.平面电极和叉指电极均可用于酶促产物的阻抗测量，叉指电极与溶液的接触面积更大更完全，测得的阻抗值较小，阳性值与阴性值的比值更大，更适用于阻抗定量测量系统;直流偏置对平面电极和叉指电极的测量结果均没有影响，实验中直流偏置设置为0 mV。 4.将磁珠液相免疫检测系统与阻抗系统有机结合，测量大肠杆菌O157∶H7的最低检测限可达102 CFU/mL，测量范围为102 CFU/mL-106CFU/mL。 结论： 辣根过氧化物酶-四甲基邻苯胺(HRP-TMB)反应体系可用于阻抗定量测量系统，经与磁珠液相免疫反应相结合，可应用于肠出血性大肠杆菌O157∶H7的定量检测，最低检测限可达102 CFU/mL或更低。由于整个实验过程中不涉及电极表面的修饰处理，电极可使用很长一段时间而无需更换，因此解决了传统电化学检测中生物活化电极作为耗材所带来的成本高、稳定性差和集成度低等问题，为实现第四代POCT奠定了基础。