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链霉素(SM)是一种氨基糖甙类抗生素,在医学上由于其存在严重的耳及肾毒性,已被其它新药所取代。但在畜禽疾病防治方面,该药对奶牛乳房炎、子宫内膜炎、鸡传染性鼻炎等有很好的疗效,仍是常用药物之一。但由于不规范用药常会引起畜禽产品中的超标残留,对人类的健康构成潜在危害。链霉素残留的检测方法比较多样化,但都存在一定的缺陷:理化分析法程序复杂、分析费用高,不适宜大量样品的检测;微生物法耗时长、灵敏度不高。酶联免疫法(ELISA)和胶体金免疫层析法(GICA)是两种快速、灵敏、特异和安全的检测技术,其规模化筛选特点更适应于常规化检测需要。为探索并建立一种能够快速有效地检测链霉素残留的方法,本研究采用单克隆抗体技术和胶体金免疫层析技术,合成并制备了人工抗原、抗链霉素单克隆抗体和胶体金,采用竞争法建立了检测SM残留的GICA方法,成功研制了链霉素胶体金免疫层析试纸条,试纸条灵敏度、特异性、稳定性等均达到检测要求。采用CMO法合成了链霉素人工抗原,用ELISA和紫外扫描法鉴定了偶联效果。通过体外扩大培养杂交瘤细胞,将细胞接种到小鼠体内,采用体内诱生法制备含抗链霉素单抗的腹水。腹水经辛酸-硫酸铵法纯化后用全抗原对单抗进行质量鉴定,蛋白浓度为4.2mg/ml,包被抗原稀释度1:1600,单抗效价为1:160000,线性检测范围为10～1000ng/ml,直线方程为y=1.0522-0.3276x,半数抑制浓度为93.22ng/ml,定量限为22.64ng/ml,检测限约为5ng/ml,单抗对新霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、恩诺沙星、氨苄青霉素、磺胺喹噁啉的交叉反应率均<0.1%。采用柠檬酸三钠还原法制备不同粒径的胶体金,并选用直径18nm左右(2ml柠檬酸三钠)的胶体金标记的单抗作为检测试剂,单抗加入量108μg/ml,标记pH控制在8.5左右(50μl/mlK2CO3)。采用进口Ahlstrom8964玻璃纤维膜作为金吸附材料,Millipore135硝酸纤维素膜作为层析材料制成试纸条。抗原、二抗浓度分别为0.2mg/ml、50倍稀释,玻纤上金标抗体的量为30%稀释量。本实验中研制的试纸条最大的优点是无需借助检测仪器,检测所需试剂已包被在试纸条上,检测快速、简便,5min内可出检测结果,适用于对链霉素残留进行现场检测。本研究也为其他兽药残留检测试纸条的研制提供了借鉴。