S,S-氰戊菊酯间接竞争酶联免疫吸附测定方法研究

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合成了半抗原2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸-α-羧基-3-苯氧基苄酯(Efva)、2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸-α-(N-丁酸基)-甲酰氨-(3-苯氧基)苄酯(Efvb)、4-[2-(4-氯代苯基)-3-甲基-丁酰胺]-丁酸(Efab)。将半抗原通过混合酸酐法与卵清蛋白(OVA)偶联作为包被抗原,通过活泼酯法与牛血清蛋白(BSA)偶联作为免疫原。免疫新西兰大白兔,获得S,S-氰戊菊酯的兔抗血清。通过同源异源分析,发现异源分析的灵敏度较高。调节甲醇含量、离子强度、pH值等影响因素进行条件优化,确立了方法一中S,S-氰戊菊酯间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件为pH7.4、40%甲醇PBS溶液、Na+0.4mol/L。建立标准竞争曲线。该方法的IC50值为3.16mg/L,最低检测限IClo值为0.0053mg/L,对甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、功夫菊酯及其代谢物戊菊酸没有明显交叉反应。在自来水、河水和土壤样品中添加0.1、1、10mg/L的S,S-氰戊菊酯,其回收率范围分别为82.27%-108.21%、83.12%-109.19%、72.04-91.23%,变异系数分别为3.80%-6.20%、2.73%-7.71%、3.11%-4.69%。达到残留检测要求。确立了方法二测定S,S-氰戊菊酯间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件为pH8.4、40%甲醇PBS溶液、Na+0.4mol/L。建立标准竞争曲线。该方法的IC50值为2.24mg/L,最低检测限IC1o值为0.0052mg/L,对甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、功夫菊酯没有明显交叉反应。在自来水、河水和土壤样品中添加0.1、1、10mg/L的S,S-氰戊菊酯,其回收率范围分别为88.50%-107.69%、85.38%-108.40%、78.30%-85.88%,变异系数分别为2.67%-3.42%、5.31%-9.74%、3.91%-5.34%。达到残留检测要求。
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