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目的:间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有优秀的自我更新、多向分化及免疫调节性能。外泌体是一类由真核细胞分泌的细胞外微囊泡,介导细胞之间的信息交流。MSCs来源的外泌体(exosomes derived from mesenchymal stem cells,MSCs-Exo)具有和MSCs相似的生物学功能,在修复组织损伤、抑制局部炎症和调节免疫中发挥重要作用。本课题旨在研究根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)来源的外泌体(exosomes derived from stem cells from apical papilla,SCAP-Exo)能否促进CD4~+T细胞向调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)转化而发挥免疫调节作用。研究方法:原代分离培养SCAP,流式细胞术检测干细胞表面标记物CD31、CD34、CD45、CD73、CD90及CD105的表达,茜素红S染色和免疫荧光染色检测其多向分化潜能。超速离心法提取SCAP-Exo,透射电镜观察其形态,纳米颗粒示踪技术(nanoparticle tracking analysis,NTA)分析其粒径大小,免疫印记法(Western blot)检测外泌体特异性标记蛋白CD9和Alix的表达。免疫磁珠分选小鼠脾脏CD4~+T细胞并进行流式细胞术鉴定。将外泌体抑制剂GW4896预处理或未处理的SCAP分别与CD4~+T细胞按1:5比例tanswell共培养72 h,以单独培养的CD4~+T细胞作为对照组,流式细胞术检测Tregs百分比,ELISA检测共培养上清液中白介素10(interleukin-10,IL-10)的表达水平。用不同浓度的SCAP-Exo处理CD4~+T细胞72h,CCK-8实验检测CD4~+T细胞增殖能力,流式细胞术检测CD4~+T细胞的凋亡率以及Tregs百分比,ELISA检测上清液中IL-10的表达水平。实验结果分别以x±s表示,采用SPSS 21.0软件进行统计学分析,两两比较采用方差分析(LSD-t检验),P<0.05为差异具有统计学意义。结果:差速离心法能够成功从SCAP培养上清中提取SCAP-Exo。透射电镜观察可见SCAP-Exo呈椭圆形杯状囊泡样结构,有完整的膜结构,内含低密度物质;NTA结果显示SCAP-Exo粒径大小约为30-150 nm;Western blot显示SCAP-Exo阳性表达外泌体标志物Alix和CD9。SCAP与CD4~+T细胞共培养体系中,加入外泌体抑制剂后,Tregs百分比和IL-10表达水平明显降低,具有统计学差异(P<0.05)。5μg/mL和15μg/mL浓度的SCAP-Exo处理CD4~+T细胞后,Tregs百分比及IL-10表达水平明显升高,具有统计学差异(P<0.05);但对CD4~+T细胞增殖及凋亡无明显影响(P>0.05)。结论:SCAP通过旁分泌途径中的外泌体促进CD4~+T细胞向Tregs转化,促进抗炎症细胞因子IL-10的分泌,从而发挥免疫调节作用。SCAP-Exo对CD4~+T细胞增殖和凋亡无影响。