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目的:探究呼吸道碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)主要耐药机制及分子流行病学,并分析比较不同种类、不同耐药基因菌株的耐药性,为指导临床用药提供合理的参考依据。方法:收集2015年-2017年我国49家医院从呼吸道标本中分离出来的553株非重复CRE,运用全自动生化鉴定仪和质谱仪进行菌株鉴定,CLSI推荐的琼脂稀释法和微量肉汤稀释法对抗菌药物进行最低抑菌浓度(MIC)的测定;采用whonet软件对菌株按不同种类、不同耐药基因进行药敏数据分析。采用mCIM试验检测菌株碳青霉烯酶表型。PCR检测包括碳青霉烯酶在内的多种β-内酰胺酶基因,并对PCR反应阳性产物进行序列测定。采用多位点序列分型(MLST)方法分别对肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和阴沟肠杆菌进行测定,分析CRE的主要流行株及同源性。结果:1.收集的553株呼吸道CRE包括465株肺炎克雷伯菌,49株大肠埃希菌,39株阴沟肠杆菌。553株CRE菌株对多粘菌素B的耐药率最低(1.4%),其次为替加环素(1.6%),临床上常用的三种碳青霉烯类抗生素耐药率均超过80%,头孢菌素及其酶抑制剂的耐药率则超过90%。其中肺炎克雷伯菌耐药率最低的为多粘菌素B(0.9%)、其次为替加环素(1.3%);大肠埃希菌未发现对替加环素耐药的菌株,多粘菌素的耐药率为8.2%;阴沟肠杆菌未发现对多粘菌素耐药菌株,替加环素的耐药率为7.7%。2.所有检出酶基因的菌株mCIM试验均为阳性表型,mCIM试验敏感度为100%。3.553株CRE中95.3%的菌株检出碳青霉烯酶基因,其中肺炎克雷伯菌以KPC-2型为主,其次为NDM-1;大肠埃希菌及阴沟肠杆菌以NDM为主,IMP基因主要在阴沟肠杆菌中检出,主要亚型为IMP-4。CRE中产KPC酶的菌株MIC≥16μg/mL占89.7%,产NDM酶的菌株 MIC≤8μg/mL 占 74.5%。4.肺炎克雷伯菌共检测出48种ST型,以ST11为主要表型,其次为ST15、ST17;大肠埃希菌共检测出9种ST型,以ST167为主要表型,其次为ST410、ST131;阴沟肠杆菌共检测出20种ST型,未见主要型别且分布甚广。结论:CRE的耐药情况十分严峻,仅有多粘菌素及替加环素显示较高敏感性,不同种类CRE其体外药物敏感试验药敏谱不同;产碳青霉烯酶为CRE耐药的主要原因,肺炎克雷伯菌以产KPC酶为主,大肠埃希菌及阴沟肠杆菌以产NDM为主,产KPC酶的菌株比产NDM酶菌株耐药程度更高;ST11为肺炎克雷伯菌的主要流行克隆,大肠埃希菌的主要ST型为ST167。