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目的:以Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)作为多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的动物模型,观察黄芪注射液干预的影响,探讨其可能的神经保护机制。方法:1.用豚鼠脊髓匀浆(guinea pig spinal cord homogenate, GPSCH )+完全福氏佐剂(complete freund’s adguvant, CFA )+百日咳疫苗原浆液(pertussis vaccine, PV)致敏Wistar大鼠,建立EAE模型。建模后每天观察大鼠神经功能评分,测量体重,并对大鼠脑和脊髓组织进行常规病理、免疫组化以及电镜等检测,通过以上指标评价EAE大鼠模型的建立情况。2.将实验大鼠共分3组:对照组(造模时用生理盐水代替GPSCH ,之后不做任何处理),模型组(自免疫日开始应用生理盐水腹腔注射4ml/kg,1/日)和治疗组(自免疫日开始应用黄芪注射液腹腔注射4ml/kg,1/日),造模后每天观察大鼠神经功能评分,在免疫后第16天取材,通过常规病理、免疫组化、ELISA、流式细胞等实验检测方法,观察病变组织的形态学变化,以及多种细胞因子、趋化因子、细胞间粘附因子和自由基的变化,探讨EAE发病机制,以及黄芪注射液治疗MS的神经保护机制。结果:1.利用豚鼠脊髓匀浆免疫Wistar大鼠,成功建立了EAE模型。Wistar大鼠于免疫后第8天开始发病,最高神经功能评分达5分,发病后8天左右开始逐渐恢复,发病高峰期脑和脊髓病理切片显示,脑和脊髓实质内大量淋巴细胞浸润,血管周围尤为明显,呈“袖套”样改变,免疫组化染色可见髓鞘脱失,神经轴索保留完好;电镜检查显示鞘膜扭曲、层面分离或断裂;对照组大鼠未见明显病理改变。2.本实验结果显示,EAE的启动过程中,CD4+ T细胞活化,同时大量致炎因子如IL-17,IL-23, MCP-1, ICAM-1,以及大量自由基产生,并可促使神经组织脱髓鞘。经黄芪注射液干预后的治疗组神经功能评分和组织形态学改变较模型组达到了统计学有显著差异的改善,且中枢神经系统IL-17,IL-23, MCP-1,ICAM-1含量均降低,血清中自由基含量也降低,同时细胞凋亡增加,统计学分析结果差异显著(P<0.01)。提示黄芪注射液可通过选择性地降低致炎性因子含量,减轻自由基损伤,增加EAE细胞凋亡,从而减轻神经组织损伤。上述机制可能是黄芪注射液保护神经细胞,治疗MS的重要的生物学基础。结论:1.利用豚鼠脊髓匀浆免疫Wistar大鼠可成功建立EAE模型。2.黄芪注射液可通过选择性地降低致炎性因子含量,减轻自由基损伤,增加EAE细胞凋亡,从而减轻神经组织损伤,在MS的治疗中起保护作用。