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犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)是细小病毒科细小病毒属成员，为无囊膜、单股DNA病毒。1978年首次报道由此病毒引起的犬细小病毒病。CPV传播迅速，以高发病率和高死亡率为特征。本实验所用CPV-GZ基于实验室前期试验分离所得，传代猫肾细胞(F-81)购自中科院上海细胞库，实验室传代培养，生长特性稳定，适合犬细小病毒生长扩繁。近年来关于犬细小病毒体外细胞培养的报道较少，本实验研究通过探索犬细小病毒在体外细胞培养过程中的生长特性及其氧化损伤机制，为细小病毒疫苗的研发奠定理论和实践基础。本实验通过不同病毒感染复数CPV-GZ接种F-81细胞，在0 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h分别采样，检测上清液中病毒滴度(HA)、乳酸脱氢酶漏出量、F-81细胞存活率以及细胞周期的变化。为了验证犬细小病毒引起F-81细胞的氧化损伤，本实验通过不同病毒感染复数CPV-GZ接种F-81细胞后，分别在0 h、24 h和48 h采样，检测上清液中过氧化氢、羟基自由基、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶、总抗氧化能力和MDA的变化。 1.CPV-GZ接种细胞后，MOI为0.10时，在36h时间点上达到CPV-GZ病毒HA滴度最高值，而MOI为0.05时，需要在48h时间点到达HA滴度的最高值，MOI为0.01时，在实验最后时刻也仅为5 log2。CPV-GZ接毒后上清液的HA滴度最高值可达9 log2。传代猫肾细胞接种不同MOI病毒后，上清液LDH活力随着上清液病毒滴度的增加而逐渐升高(P<0.05)。 2.本实验采样MTT法检测CPV-GZ侵染细胞后F-81细胞的增殖活性。MOI为0.05、0.10、0.15时，F-81活细胞数量均在36 h处于最高值，36 h以内活细胞数量增加明显(P<0.05)，之后迅速下降(P<0.05)，并且都在60 h达到最低值。进一步通过流式细胞进行细胞周期分析发现：24 h时，以MOI为0.10接种细胞，细胞G1期DNA含量显著下降(P<0.05)，S期和G2期DNA含量均显著高于对照组和低剂量接毒组(P<0.05)，相对于空白对照组。 3.猫肾细胞在接种不同病毒感染复数病毒后，表现出了不同的氧化应激水平。MOI为0.10时，F-81细胞在接种后24 h出现羟基自由基和过氧化氢上清液含量上升(P<0.05)。从而打破了F-81细胞代谢环境的氧化还原水平，启动细胞的抗氧化功能，24 h时，高病毒感染复数接种F-81细胞的培养基上清液SOD、GSH-Px、GR、T-AOC和MDA均明显升高，与空白对照组比较有显著差异性(P<0.05)。GSH-PX和SOD能促进脂质过氧化物分解，对细胞具有抗氧化保护作用。 通过实验研究得出如下结论：CPV-GZ病毒影响F-81细胞的增殖，使细胞呈现出先增加后降低的趋势；高MOI接种细胞24 h，使F-81细胞不同周期DNA含量发生改变，G1期DNA含量显著下降，S期和G2期DNA含量显著升高；细胞在接种不同MOI病毒后，表现出了不同的氧化应激水平，高MOI接种细胞24 h，F-81细胞的培养基上清液SOD、GSH-Px、GR、T-AOC和MDA等明显升高。