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第一部分 公共引物介导的多重PCR技术在13种转基因大豆品系检测中的应用 目的：在本实验室针对12种转基因大豆品系建立的多重PCR基础上，引入2017年国家农业部允许进口的MON87705品系，用品系特异性检测的方法建立一种低成本、特异性高和灵敏度高的多重PCR 体系，用来同时检测 13 种转基因大豆品系（MON87701、GTS40-3-2、MON89788、CV127、A2704、A5547、DP356043、DP305423、MON87705、MON87769、MON87708、DP305423 × GTS40-3-2、MON87701×MON89788，其中复合性状转基因大豆品系为DP305423×GTS40-3-2、MON87701×MON89788），提高多重PCR检测通量的同时，验证多重PCR体系的包容性。 方法：检验已筛选的公共引物与新品系MON87705 基因组的特异性，再以品系特异性的检测方法对 MON87705 品系设计特异性引物，在特异性引物5端连接公共引物形成特异性嵌合引物（其他转基因大豆的特异性引物来自本实验室前期设计），通过转基因大豆品系标准品，检测11种转基因大豆的特异性嵌合引物特异性和敏感性以及多重体系特异性和敏感性，建立最优的公共引物介导的多重 PCR。对市场上可能含有转基因大豆成分的产品共73份，进行多重检测并与国家规定的方法进行比较。 结果：在原来的10重PCR的基础上加入新品系MON87705，设计的特异性嵌合引物能够特异性扩增 13 种转基因大豆品系（包含 2 种复合性状），MON87701、DP356043、DP305423、CV127、MON87769、A2704、GTS40-3-2、MON87705、MON87708、MON89788、A5547对应的条带大小分别是137bp、179bp、233bp、269bp、305bp、355bp、405bp、462bp、505bp、589bp、664bp。多重体系敏感性达到0.1%，超过欧盟标准0.9%。73份豆制品中共检出42份(57.5%）含有转基因成分，与国家农业部规定标准方法的检出数相同 。 结论：本课题构建了一种以公共引物为介导的多重PCR（UP-MPCR）检测体系，可同时检测目前为止我国允许进口的转基因大豆品系13种（包含2种复合性状转基因大豆品系），具有高通量、高敏感性、高特异性的同时，具有一定的包容性。 第二部分 检测6种常见脑炎病毒多重PCR体系的建立和应用 目的：建立单纯疱疹病毒1（HSVⅠ），2型（HSVⅡ）、水痘带状疱疹病毒（VZV）、EB病毒（EBV）、肠道病毒71型（EV71）及巨细胞病毒（CMV）的多重聚合酶链式反应（mPCR）体系。 方法：对HSVⅠ，HSVⅡ，VZV，EBV，EV71 及 CMV 设计特异引物。建立mPCR检测方法，并进行敏感性验证。收集苏州大学附属第一医院收治的15例临床疑似病毒性脑炎（VE）患者脑脊液（CSF）标本，采用该mPCR体系进行核酸检测。 结果：6对引物特异性扩增六种病毒，构建的mPCR体系敏感度超过103copies/μ；该mPCR体系对15例临床脑脊液标本进行检测，共6例阳性标本（6/15，40%），其中HSVⅠ5例，CMV共1例。 结论：初步建立了一种能够同时筛查6种常见脑炎病毒的mPCR方法。