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朱砂叶螨是一种极为重要的农业害螨。长期以来对害螨的防治主要依赖于使用有机合成杀虫杀螨剂,目前在其常发区已经呈现抗药谱广,抗性水平高的特点。国内外学者对螨类抗性机制的研究大都局限于生物化学水平,而对螨类抗性的分子生物学机制却知之甚少,这无疑影响了人们对螨类抗性本质的认识和螨类抗性治理措施的制订。本文以分布广、食性杂、危害大的重要农业害螨——朱砂叶螨为研究对象,对其室内阿维菌素汰选品系进行抗性测定和酯酶同工酶研究,结果表明酯酶活性增强与朱砂叶螨对阿维菌素产生抗性有关。在此基础上,对朱砂叶螨酯酶基因进行了克隆和序列分析,主要研究结果如下: 1.朱砂叶螨抗阿维菌素品系选育 朱砂叶螨相对敏感品系采自重庆市北碚区田间的豇豆苗上,已在人工气候室内用盆栽豇豆苗饲养了5年。本研究选用生物源类农药阿维菌素对朱砂叶螨室内品系进行抗性选育,经过约50余代的筛选,朱砂叶螨对阿维菌素的抗性倍数达11.29。从各次毒力回归线的坡度分析,如果继续用药,朱砂叶螨对阿维菌素的抗性还会上升,但抗性发展速率比较缓慢。 2.朱砂叶螨抗阿维菌素品系酯酶同工酶研究 朱砂叶螨相对敏感品系和阿维菌素抗性品系酯酶同工酶电泳图谱显示。朱砂叶螨敏感品系和阿维菌素抗性品系均至少有4条显色深浅不一的谱带,其中E3酯酶显色最深,且阿维菌素抗性品系的显色更深,表明在阿维菌素抗性品系中,E3酯酶活性增强与朱砂叶螨对阿维菌素产生抗性有关。 3.朱砂叶螨酯酶基因片段cDNA克隆及序列分析 3.1 朱砂叶螨酯酶基因cDNA 3’末端克隆 在对不同动物酯酶基因进行多重比对后设计了一个RACE引物,克隆得到了朱砂叶螨酯酶基因的3’末端。所得朱砂叶螨相对敏感品系酯酶cDNA片断总长度,包括引物在内为1553bp,除去引物长度为1507bp,其中编码区长1260bp,编码420个氨基酸,3’UTR区长244bp:朱砂叶螨抗阿维菌素品系酯酶cDNA片断总长度,包括引物在内为1563bp,除去引物长度为1517bp,其中编码区长1260bp,也编码420个氨基酸,3’UTR区长254bp。这两个序列在GenBank