【摘 要】
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高温蛋白酶具有广泛的应用价值，开展产高温蛋白酶菌株筛选及其酶学性质研究，可为高温蛋白酶的进一步开发利用提供重要依据。
本论文从河南农田土样与江苏句容发酵牛粪中分
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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高温蛋白酶具有广泛的应用价值，开展产高温蛋白酶菌株筛选及其酶学性质研究，可为高温蛋白酶的进一步开发利用提供重要依据。
本论文从河南农田土样与江苏句容发酵牛粪中分离、筛选到两株产高温蛋白酶菌株：中等嗜热菌BY25与专性嗜热菌JR19。
BY25经16S rDNA序列分析，初步鉴定为枯草芽孢杆菌，其最高生长温度为55℃，最适生长温度50℃，最佳产酶温度30℃，最佳培养起始pH为pH8.0，最佳碳源为葡萄糖，高供氧量明显提高菌株产酶能力。在以上最佳产酶条件下培养52 h，上清液蛋白酶活力达4170 U/ml。酶学性质研究表明，该蛋白酶为高温中性金属蛋白酶，最适反应pH为7.0，最适反应温度为55℃，具有良好的pH耐受性和较好的热稳定性；EDTA能强烈抑制酶活力，而Fe2+、Cu2+对酶活力也具有一定抑制作用；表面活性剂SDS可抑制该蛋白酶活性。BY25可产生三种胞外蛋白酶，可通过培养基的更换调控产生蛋白酶的种类，如在F5M培养基中产生蛋白酶主要为碱性蛋白酶，而在J培养基中主要产生中性蛋白酶。
JR19的最适生长温度为65℃，可在产酶培养基4中稳定产生高温蛋白酶。瓜19产生蛋白酶的最适反应pH为7.0，最适反应温度为70℃；65℃及以下具有很好的温度稳定性，70℃时半衰期约为90 min；在pH5～12的缓冲液中孵育30min后的剩余酶活力均在95％以上，具有很高的热稳定性和良好的pH耐受性；为高温中性金属蛋白酶，EDTA能强烈抑制酶活性，而Fe2+、Cu2+对酶活力具有一定抑制作用；对表面活性剂SDS具有很好的抗性。酶谱分析表明，JR19培养液中含有一种蛋白酶，其分子量为35.0 kDa。
综上所述，本研究筛选获得的菌株BY25及JR19均可产生高温蛋白酶，其中BY25产酶量较高，且可对其产酶种类进行调控，而菌株JR19产生的蛋白酶则具有高热稳定性及对表面活性剂具有很强的抗性。
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