【摘 要】
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目的:研究目的是利用胶质瘤细胞系来探索Nimbolide抑制胶质瘤活性及诱导其死亡的相关分子机制。方法:在本研究中,通过MTT检测药物对肿瘤细胞存活率的影响;通过细胞划痕实验来检测肿瘤细胞迁移能力的变化;通过细胞克隆实验观察Nimbolide对胶质瘤细胞增殖的影响;通过流式细胞仪检测胶质瘤细胞的死亡方式及药物对细胞周期的影响;通过DCFH-DA探针检测药物对胶质瘤细胞中活性氧(reactive o
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目的:研究目的是利用胶质瘤细胞系来探索Nimbolide抑制胶质瘤活性及诱导其死亡的相关分子机制。方法:在本研究中,通过MTT检测药物对肿瘤细胞存活率的影响;通过细胞划痕实验来检测肿瘤细胞迁移能力的变化;通过细胞克隆实验观察Nimbolide对胶质瘤细胞增殖的影响;通过流式细胞仪检测胶质瘤细胞的死亡方式及药物对细胞周期的影响;通过DCFH-DA探针检测药物对胶质瘤细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成水平的影响;通过JC-1检测法检测胶质瘤细胞中线粒体膜电位的变化;通过免疫蛋白印迹法(western blotting)检测胶质瘤细胞周期、凋亡、通路等相关蛋白分子的表达水平变化。结果:1.MTT结果显示Nimbolide能浓度及时间依赖性的显著降低胶质瘤细胞存活率,而对正常细胞影响较小。流式细胞学检测结果表明Nimbolide能够诱导胶质瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞。western blotting结果表明在Nimbolide的作用下,胶质瘤细胞中凋亡及周期蛋白Bcl-2和Cyclin B1蛋白表达减少;Bax,cleaved PARP-1和cleaved caspase-3蛋白表达增高。2.Nimbolide能够抑制胶质瘤细胞克隆形成,浓度依赖性抑制细胞增殖。细胞划痕实验显示胶质瘤细胞迁移能力也明显降低。Western blotting结果表明在Nimbolide能抑制胶质瘤细胞中p-PI3K、p-AKT以及p-m TOR的表达。在用IGF-1预处理后,IGF-1逆转了Nimbolide诱导的胶质瘤细胞中AKT的减少。此外,它在很大程度上减弱了NIM诱导的细胞活性降低。而AKT的抑制剂MK2206阻断了胶质瘤细胞中IGF-1诱导的AKT激活,并逆转了IGF-1诱导细胞中的活性增加。3.Nimbolide能够诱导胶质瘤细胞中ROS升高,JC-1检测法的结果表明ROS升高导致肿瘤细胞线粒体膜电位明显下降。抗氧化剂NAC处理后不仅显著抑制了Nimbolide诱导的细胞内ROS的增加,还逆转了Nimbolide导致的细胞活性降低和凋亡增加。Western blotting结果表明,NAC部分逆转了Nimbolide导致的p-AKT的表达。结论:1.Nimbolide能显著抑制胶质瘤细胞的活力,呈时间和浓度依赖性;抑制胶质瘤细胞的克隆增殖,并且降低了其迁移能力。2.Nimbolide能调控凋亡、周期相关蛋白的表达,降低线粒体膜电位,诱导胶质瘤细胞凋亡增加及G2/M周期停滞。3.Nimbolide通过诱导胶质瘤细胞线粒体内ROS升高,继而抑制AKT信号通路的活性,诱导胶质瘤细胞凋亡增加。
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