【摘 要】
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本文主要根据GenBank已公布的兔防御素NP-1基因和猪防御素pBD-1基因序列，分别选用原核或真核高效表达载体构建重组表达质粒，以期在大肠杆菌或COS-7细胞中得到高效表达，为进一步
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本文主要根据GenBank已公布的兔防御素NP-1基因和猪防御素pBD-1基因序列，分别选用原核或真核高效表达载体构建重组表达质粒，以期在大肠杆菌或COS-7细胞中得到高效表达，为进一步研究这两个抗菌肽奠定基础。本文主要根据GenBank已公布的兔防御素NP-1基因和猪防御素pBD-1基因序列，分别选用原核或真核高效表达载体构建重组表达质粒，以期在大肠杆菌或COS-7细胞中得到高效表达，为进一步研究这两个抗菌肽奠定基础。
在实验一中，根据兔防御素NP-1基因序列，选用大肠杆菌偏爱的密码子，应用计算机辅助设计，去除基因原有的影响其在大肠杆菌中高效表达的成分，对原有的NP-1基因序列进行改造，经改造后的NP-1基因其编码的氨基酸多肽链一级结构保持不变。采用PCR技术将两个片段延伸成一条完整的NP-1基因链。将该基因扩增得到的带酶切位点的产物克隆到pGEM-T easy Vector上，经酶切鉴定和序列分析正确后，再经双酶切连接到用同样酶切的载体pMAL-p2X上，并将得到的重组表达载体转化大肠杆菌E.coli TB1，以浓度为0.1mM的IPTG诱导表达。
在实验二中，根据猪防御素pBD-1基因序列，应用计算机软件设计出一对带有酶切位点Hind Ⅲ，Xba Ⅰ的引物。从新鲜的猪舌表皮组织细胞中分离提取总RNA，经逆转录PCR(RT-PCR)扩增出猪防御素pBD-1基因的第一链cDNA，将回收的第一链cDNA产物用上述特异引物再次扩增、回收，得到约213bp的目的片段，用T4DNA连接酶将其克隆到pGEM-T easy Vector上，然后双酶切克隆质粒，再将回收的目的条带连接到同样经双酶切回收后的真核表达质粒pcDNA3.1(+)上。经酶切鉴定和序列分析，猪防御素pBD-1基因成功连接到表达载体上。
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