论文部分内容阅读
目的：三苯氧胺（TAM）是一种非固醇类药物，在乳腺癌的预防和治疗中最为常用，其作用机理是竞争性地抑制雌激素与雌激素受体（ER）的结合。本论文主要研究了不同浓度TAM作用于两种乳腺癌细胞后，对细胞的增殖、c-Jun的表达以及AP-1活性的影响，探讨c-Jun在三苯氧胺抑制乳腺癌细胞增殖中的作用。方法：1、不同浓度的TAM作用于ER阳性乳腺癌细胞株MCF-7和ER阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-435后，应用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖能力；RT-PCR、Western Blot检测c-Jun mRNA和蛋白水平的表达；同时应用双荧光素酶报告基因技术分析不同浓度TAM对两种乳腺癌细胞株中AP1（PMA）、AP1信号路径的转录调控作用。2、c-Jun真核表达载体的构建：通过PCR的方法克隆得到c-Jun基因全长序列，装入真核表达载体pIRES2-EGFP；重组质粒表达载体经酶切、测序鉴定；将c-Jun真核表达载体pIRES2-c-Jun和c-Jun干扰表达载体pGPU6/GFP/Neo-c-Jun-shRNA分别通过脂质体介导转染MCF-7细胞后，用不同浓度的TAM处理细胞，应用CCK-8试剂盒检测各组细胞的增殖能力。结果：1、TAM对细胞增殖以及c-Jun表达的影响：CCK-8结果显示，与对照组比较，不同浓度的TAM均可抑制MCF-7细胞和MDA-MB-435细胞的增殖，且抑制率随剂量增大而增高；RT-PCR、Western Blot检测结果显示，不同浓度TAM对c-Jun表达没有显著性影响；荧光酶报告基因结果显示，TAM对MCF-7细胞株中AP1（PMA）相关信号通路有激活作用，且对TAM呈剂量依赖性。2、c-Jun真核表达载体的构建：重组质粒表达载体经酶切、测序鉴定，证实载体构建成功；c-Jun对TAM抑制MCF-7细胞增殖作用中的影响：CCK-8结果显示，高表达c-Jun，可以提升TAM对MCF-7细胞增殖的抑制作用；而低表达c-Jun则降低了TAM对MCF-7细胞增殖的抑制作用。结论：1、TAM既可以抑制ER阳性乳腺癌细胞MCF-7的增殖，也可以抑制ER阴性乳腺癌细胞MDA-MB-435的增殖；TAM对两株细胞中c-Jun的表达没有显著性影响，但TAM可激活MCF-7细胞中PKC通路，从而诱导AP-1活性的升高。2、c-Jun真核表达载体构建成功，c-Jun可能参与了TAM抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖。综上所述，不同浓度的TAM均可抑制MCF-7细胞和MDA-MB-435细胞的增殖，且抑制率随剂量增大而增高，进一步研究表明TAM对MCF-7细胞增殖的抑制可能是通过PKC途径激活c-Jun来实现的。