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目的:研究核受体PPARα/γ信号通路在高脂性脂肪性肝炎发病中的作用及其可能的病理机制,为合理使用作用于PPARα/γ靶标的药物治疗高脂性脂肪性肝炎提供依据。方法:体内试验采用雄性SD大鼠,随机分为溶媒对照组、高脂性脂肪性肝炎模型组、PPARα激动剂非诺贝特20 mg/kg组、PPARγ激动剂罗格列酮4 mg/kg组、非诺贝特+罗格列酮组、PPARα拮抗剂(MK886)1 mg/kg组、PPARγ拮抗剂(GW9662)1 mg/kg组和PPARα/γ拮抗剂组。在用高脂高糖乳剂复制高脂性脂肪性肝炎模型时,同时给予相应的药物处理6周,然后取血液和肝脏,测定血和肝中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量、炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8和MCP-1水平,以及血中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,并计算肝重指数;在光镜下观察肝脏的形态学改变;采用RT-PCR和Western blot方法检测肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α/γ、固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1c、脂肪酸合酶(FAS)、二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)、脂蛋白脂酶(LPL)m RNA和蛋白表达以及NF-κB及它的抑制蛋白IκB-α的蛋白表达情况。体外实验选用大鼠BRL肝细胞,采用油酸联合脂多糖(LPS)复制高脂性脂肪性肝炎细胞模型,以PPARα/γ激动剂和/或拮抗剂预处理2 h后,测定细胞中PPARα/γ及其靶基因SREBP-1c、FAS、DGAT、肉毒碱棕榈酰基转移酶(CPT1A)、LPL和参与炎症的NF-κB及它的抑制蛋白IκB-α表达,用免疫细胞化学法观察NF-κB的胞核转位情况,用ELASA法测定上清液中的炎症细胞因子(IL-6和TNF-α)水平,用比色法测定培养细胞上清液中的ALT、AST和MDA含量。结果:高脂性脂肪性肝炎大鼠给予PPARα激动剂非诺贝特和/或PPARγ激动剂罗格列酮、PPARα拮抗剂MK886和/或PPARγ拮抗剂GW9662拮抗剂后,可分别使血清和肝组织的TC和TG水平明显降低和升高(P<0.05或P<0.01),且PPARα/γ激动剂联用的调脂作用更为明显。非诺贝特能分别增加和减少血清和肝脏FFA的水平(P<0.01),而罗格列酮能降低血清和肝脏FFA的水平(P<0.01),PPARα/γ激动剂联用可以降低肝组织中的FFA水平(P<0.01),但对血清中的FFA水平未见有明显影响。PPARα拮抗剂应用后显著降低血清FFA的水平(P<0.01),PPARγ拮抗剂、PPARα/γ拮抗剂联用均可使血清中的FFA水平显著增加(P<0.01),但PPARα/γ拮抗剂单用或联用对肝组织中的FFA水平影响不明显。结果提示,非诺贝特和罗格列酮对血清FFA的影响是明显不同的,但是它们都可降低肝组织中的FFA水平,因此,采用PPARα/γ激动剂联用可避免FFA升高产生的不利作用。PPARα/γ激动剂或拮抗剂单用和联用可以显著增加肝组织GSH、SOD和血清GSH的含量(P<0.05或P<0.01),PPARα/γ激动剂单用和联用后血清SOD的含量也显著增加(P<0.01);而血清和肝组织MDA的含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。给予PPARα/γ拮抗剂后,血清MDA的含量则显著增加(P<0.01),但对肝组织MDA的含量则未见明显影响。结果提示,PPARα/γ激动剂联用可显著的降低血清及肝组织中的MDA含量,升高肝组织中GSH的含量,发挥抗氧化的作用。PPARα/γ激动剂可以明显降低血清和肝组织TNF-α,IL-6,IL-8和MCP-1的水平(P<0.05或P<0.01),相反地,给予PPARα/γ拮抗剂后均不同程度的升高,特别是在MK886和GW9662联用组升高的更加明显(P<0.05或P<0.01)。同时,罗格列酮可以显著降低大鼠血清ALT的水平(P<0.01)。但非诺贝特、非诺贝特联合罗格列酮、PPARα/γ拮抗剂对大鼠血清ALT和AST无明显影响。我们的研究结果表明,PPARγ的激活可更有效的降低血清和肝组织中的炎性细胞因子水平、肝组织中MDA的含量以及血清ALT的水平,表明氧化应激状态和炎症反应可能主要由PPARγ来调控。应用非诺贝特、非诺贝特联合罗格列酮后可以显著增加肝重和肝重系数(P<0.01),而应用罗格列酮后可以降低肝重和肝重系数(P<0.05或P<0.01),二者单用或联用对大鼠体重无明显影响。当给予PPARα/γ拮抗剂后,大鼠体重、肝重和肝重系数均无明显改变。病理学检查结果显示,给予非诺贝特和非诺贝特联合罗格列酮后,肝细胞的脂肪变性程度显著减轻(P<0.01);非诺贝特和罗格列酮单用和联用后,肝细胞的炎性细胞浸润也明显减轻(P<0.05);给予罗格列酮和非诺贝特联合罗格列酮后,肝细胞的坏死的程度也明显的改善(P<0.05)。非诺贝特和罗格列酮单用和联用,均可显著升高大鼠肝组织中PPARα、PPARγ、LPL m RNA和蛋白以及IκB-α的蛋白表达,降低SREBP-1c、FAS、DGAT m RNA和蛋白表达以及NF-κB的蛋白表达(P<0.01);相反,MK886或MK886联合GW9662后,可使PPARαm RNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);GW9662或MK886联合GW9662后,则可使PPARγm RNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);MK886和GW966单用和联用后,均可使用LPL m RNA和蛋白和IκB-α的蛋白表达显著降低,而NF-κB、SREBP-1c、FAS、DGAT m RNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01),这些基因表达的变化与脂质和炎症因子水平的变化是相一致的,提示PPARα/γ在高脂性脂肪性肝炎的病理机制中起着重要作用。在体外脂肪性肝炎细胞模型上,用PPARα激动剂非诺贝特200μg/m L和/或PPARγ激动剂罗格列酮10μg/m L、PPARγ拮抗剂GW9662 10μmol/L、非诺贝特联合GW9662预处理2 h后,均可见PPARα蛋白表达显著上调(P<0.01);而用MK886 1μmol/L、MK886和罗格列酮预处理2 h后,则对PPARα的蛋白表达有明显抑制作用(P<0.05或P<0.01)。用非诺贝特和/或罗格列酮、MK886、MK886+罗格列酮预处理2 h后,均可使PPARγ的蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);改用GW9662、非诺贝特和GW9662预处理2 h后,则可明显抑制PPARγ的蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。非诺贝特和/或罗格列酮、MK886+罗格列酮、非诺贝特+GW9662预处理后,对SREBP-1c、FAS、DGAT以及CPT1A、LPL的蛋白表达分别具有明显的下调和上调作用;MK886、GW9662预处理后,对SREBP-1c、FAS、DGAT以及CPT1A、LPL的蛋白表达分别具有明显的上调和下调作用(P<0.05或P<0.01)。油红O染色结果显示,PPARα/γ激动剂、PPARα/γ拮抗剂单用或联用预处理后,可以分别减少和增加油酸刺激BRL肝细胞内脂滴的含量。非诺贝特和/或罗格列酮、MK886和罗格列酮、非诺贝特和GW9662预处理后,可明显降低MDA水平;用MK886、GW9662预处理则可明显增加MDA水平(P<0.05或P<0.01)。非诺贝特和/或罗格列酮预处理后,均可明显降低ALT、AST的水平,MK886、GW9662均可明显增加ALT、AST的水平(P<0.05或P<0.01)。对细胞因子而言,非诺贝特和/或罗格列酮、MK886和罗格列酮、非诺贝特和GW9662的预处理,可明显降低TNF-α和IL-6水平,而用MK886、GW9662预处理后可明显增加TNF-α和IL-6水平(P<0.05或P<0.01)。非诺贝特和/或罗格列酮、MK886和罗格列酮预处理后,可明显下调NF-κB和上调IκB-α的蛋白表达以及减少NF-κB的胞核转位,非诺贝特联合GW9662也可减少NF-κB的胞核转位,但MK886、GW9662预处理后,可明显上调NF-κB和下调IκB-α的蛋白表达及有显著的促NF-κB胞核转位作用(P<0.01)。这些结果显示,给予PPARα/γ激动剂和/或拮抗剂后对脂质代谢、氧化应激和炎症细胞因子的影响与体内结果相一致。结论:PPARα/γ信号通路通过调节脂质代谢、氧化应激和炎症细胞因子的产生参与高脂性脂肪性肝炎的发病,体内外的研究结果均证实PPARα/γ激动剂联用可明显改善这些异常的病理改变,在体外培养细胞上用PPARα激动剂联合PPARγ拮抗剂或PPARγ激动剂联合PPARα拮抗剂预处理后,在一定程度上同样可改善这些异常的病理变化。这些发现提示PPARα/γ可作为高脂性脂肪性肝炎潜在的治疗靶标。