【摘 要】
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根据已发表的绵羊种布鲁氏菌(63/290)外膜蛋白基因omp2b的核苷酸序列设计引物,从新疆绵羊种(80/019)布鲁氏菌基因组中扩增omp2b基因,通过T4DNA连接酶将扩增基因片段克隆到pBS
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根据已发表的绵羊种布鲁氏菌(63/290)外膜蛋白基因omp2b的核苷酸序列设计引物,从新疆绵羊种(80/019)布鲁氏菌基因组中扩增omp2b基因,通过T4DNA连接酶将扩增基因片段克隆到pBS-T载体上,热激法转化受体菌DH5α,蓝白斑筛选阳性菌落,酶切鉴定、测序,获得长约1089bp的片段,序列分析结果与绵羊种(63/290)omp2b同源性达89.72%,有部分碱基发生了颠换,突变及缺失,第384到413个碱基与GenBank所发表的绵羊种布鲁氏菌(63/290)omp2b的基因有30个碱基的显著缺失。与羊种布鲁氏菌omp2b同源性高达96.10%,无上述30个碱基缺失。通过所克隆的基因和其他布鲁氏菌外膜蛋白omp2b的进化树分析发现其和羊种布鲁氏菌的亲缘关系最近,同源性最高。用BamHI/XhoI同时双酶切重组质粒pBS-T-omp2b和原核表达载体pET--28a(+),将切下目的片段omp2b克隆于原核表达载体pET--28a(+),构建成重组质粒,经测序有正确读码框,热激法转化受体菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,SDS-PAGE,Western-blot检测在相对分子量38kDa处有表达带。获得了新疆绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白omp2b基因片段,并在大肠杆菌中实现了表达。此研究为进一步研究绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白的免疫特性,探索其作为诊断抗原和为开发基因工程疫苗奠定基础。
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