【摘 要】
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肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率均占全部肿瘤发病率和死亡率的首位,根据世界卫生组织分支机构IARC的报告,2008年全球的肺癌发病人数达160.8万,约占所有癌
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肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率均占全部肿瘤发病率和死亡率的首位,根据世界卫生组织分支机构IARC的报告,2008年全球的肺癌发病人数达160.8万,约占所有癌症发病人数的12.7%,发病比列占首位。而小细胞肺癌是在各亚型原发性肺癌中恶性程度最高、预后最差,5年生存率仅1%-7%。在最新诊断的肺癌中,小细胞肺癌占20%-25%,男性患者较多,男女比例为2：1。由于其生长迅速,侵袭力强,往往在临床上发现该病时就已经转移至肺外,如不对病情进行及时有效的干涉,患者将在几个月内死亡。临床上对小细胞肺癌的早期诊断和制定合理的治疗方案,并及时评价疗效对治疗和提高生存率尤为重要。目前ProGRP是研究较多且最有价值的小细胞肺癌血清肿瘤标志物,特别是人血清中ProGRP31-98肽的浓度跟小细胞肺癌的发生发展及治疗效果密切相关。为建立人血清中ProGRP31-98肽检测试剂盒用于小细胞肺癌的早期诊断,本实验从小细胞肺癌组织中提取了总RNA,根据Genbank的核酸序列数据库设计了引物,扩增出了ProGRP31-98肽的目的基因,TA克隆至pMD-18T载体中,测序结果表明序列与文献报道一致。将ProGRP31-98肽的目的基因用BamHI和EcoRI从T载体中酶切出来,克隆至带有GST纯化标签及凝血酶蛋白酶切位点的pGEM-2T表达载体中,转化到BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达ProGRP31-98融合蛋白,将融合蛋白酶切纯化后可得ProGRP31-98肽,并进一步制备了单克隆抗体和兔多克隆抗体分别用于包被和标记,最终建立了ProGRP31-98的ELISA检测方法。本文利用基因工程技术及抗体制备技术,制备了小细胞肺癌检测中所需的抗原及抗体,并最终建立了人血清ProGRP31-98的ELISA定量检测方法,可用于小细胞肺癌的早期诊断,为小细胞肺癌的评价疗效和提高患者生存率提供一个可靠的方法。
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