【摘 要】
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论文小结:(1)获得了HBV adr和adw2亚型的S基因片段和前S1(21-47aa)基因片段拼接基因的两种重组野毒株HBsAg真核表达质粒:pSS1adw2及pSS1adr.(2)在真核细胞COS-7细胞中瞬时转
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论文小结:(1)获得了HBV adr和adw2亚型的S基因片段和前S1(21-47aa)基因片段拼接基因的两种重组野毒株HBsAg真核表达质粒:pSS1adw2及pSS1adr.(2)在真核细胞COS-7细胞中瞬时转染了两种HBV优势血清亚型的表面抗原表达质粒pSS1adw2及pSS1adr,对转染后回收的细胞上清进行了HBsAg的检测,两种细胞上清均具有较强的抗原性,表明载体的构建合理,转染成功.为进一步引入位点变异,了解点突变对HBsAg抗原性的影响奠定了基础.(3)通过PCR法引入点变异,经酶切鉴定和测序,获得了含有不同变异位点的三种重组变异株HBsAg真核表达质粒:pSS1adw2-145Arg、pSS1adr-126 Ser和pSS1adr-126 Asn.(4)在COS-7细胞中瞬时转染了三种变异株重组质粒HBsAg pSS1adw2-145Arg、pSS1adr-126 Ser和pSS1adr-126 Asn,对细胞上清进行了HBsAg的检测,发现不同变异株HBsAg的抗原性与野毒株HBsAg有所不同.(5)对真核表达的S基因野毒株和变异株表达质粒的细胞上清的HBsAg进行了初步比较:野毒株HBsAg和两种126位变异株HBsAg具有较好的抗原性,变异株和野毒株无显著性差异;145位点突变后导致HBsAg的抗原性下降,变异株的抗原性与野毒株相比有显著性差异,推测是由于145位点变异影响了"a"抗原决定簇的空间结构,从而降低了其与抗-HBs的结合能力.
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