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背景与目的:microRNA(简称miRNA)是一种内源性的，约由20-24个核苷酸组成的小RNA，它参与了细胞生长发育、分化凋亡，甚至是肿瘤的发生发展等一系列重要进程。大量的研究证明，miRNA可能同时还具有癌基因及肿瘤抑制因子的双重作用。深入研究miRNA在肿瘤发生发展过程中的调控作用，阐明其在不同肿瘤中的促癌或抑癌作用，以及它与肿瘤复发转移的关系，并进一步探测其下游靶基因，将对癌症的诊断和靶基因治疗有着重要的意义。转化生长因子-beta(TGF-β)诱导的细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymaltransition，EMT)被发现参与了包括肺癌在内的多种疾病的发生发展。本研究通过观察miR-23a在参与TGF-β诱导的细胞上皮间质转化过程中的作用，以及对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移和侵袭能力的影响，明确miR-23a是否通过TGF-β/SMADs信号转导通路参与对EMT的调节作用，检测胰岛素受体底物1(IRS-1)基因是否是miR-23a的直接靶点，miR-23a是否通过靶向调控IRS-1介导NSCLC的侵袭转移，并分析IRS-1的表达和非小细胞肺癌临床病理特征的关系。 方法:1.采用15例非小细胞肺癌细胞系，提取细胞总RNA，Real-time PCR(RT-PCR)法定量分析miR-23a的表达;采用Western-blot免疫印迹技术观察高/低表达miR-23a的非小细胞肺癌细胞系中E-钙粘蛋白(E-cadherin)，N-钙粘蛋白(N-cadherin)和Smad2/3蛋白表达情况，给予5ng/ml TGF-β刺激观察蛋白表达的变化;将miR-23a的抑制物(anti-miR-23a)以及SMAD2/3 siRNA分别转染入肺癌细胞后行TGF-β刺激，以RT-PCR方法验证miR-23a是否被有效抑制，以Western-blot免疫印迹技术验证SMAD2/3蛋白被有效的抑制，并进一步观察EMT现象。2.应用Transwell技术检测miR-23a对A549细胞的迁移和侵袭能力的影响。采用Western-blot免疫印迹技术观察IRS-1蛋白与miR-23a表达水平的关系。采用荧光素酶报告基因法检测IRS-1对miR-23a表达的影响。并进一步通过细胞转染技术和Transwell方法观察miR-23a是否通过靶向作用于IRS-1调控非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭。3.收集我院2006年1月至2007年1月接受切除手术的随访资料完善的105例非小细胞肺癌患者的蜡块，应用免疫组化方法检测并分析IRS-1的表达情况。同时，采用SPSS18.0软件统计分析IRS-1与非小细胞肺癌患者临床病理特征的相关性。 结果:(1) miR-23a参与TGF-β诱导的肺癌细胞上皮间质转化，表现为上皮细胞标记物E-cadherin的缺失，转化为间质细胞N-cadherin，细胞转染miR-23a抑制物后TGF-β诱导的EMT现象明显被抑制。(2) miR-23a调节TGF-β诱导的上皮间质转化通过TGF-β/SMAD通路，将SMAD2/3 siRNA转染入肺癌细胞后行TGF-β刺激，miR-23a表达明显减少。(3) miR-23a显著提高了A549细胞的迁移和侵袭的能力。细胞转染miR-23a抑制物后穿膜细胞数显著减少，反之，高表达miR-23a组穿膜细胞数明显增多(4) Western-blot结果显示miR-23a与IRS-1的表达具有负相关性。荧光素酶实验表明IRS-1是miR-23a的直接靶基因，表现为miR-23a与IRS-1的靶序列发生了结合，miR-23a显著降低了荧光素酶活性。(5)高表达IRS-1组细胞的迁移与侵袭能力明显降低，反之，si-IRS-1组穿膜细胞数显著增多。miR-23a与IRS-1共转染组较miR-23a组，穿膜细胞数明显减少。但anti-miR-23a与si-IRS-1共转组与si-IRS-1组间差异不明显。(6)对105例NSCLC患者的免疫组化检测结果表明，26.7％的患者IRS-1呈现低表达，而73.3％的患者高表达IRS-1。KaPlan-Meier生存分析显示，IRS-1高表达患者具有显著长的生存时间（P=0.002）和无病生存期(P＜0.001)。Cox多因素回归分析显示IRS-1是NSCLC的一个独立预后因素(RR=0.413，CI=0.238-0.718,P=0.002)。 结论:(1) MiR-23a通过TGF-β/SMAD通路上调TGF-β诱导的非小细胞肺癌细胞上皮间质转化，本实验首次证明了MiR-23a在肺癌中作为一种癌基因存在，并参与肺癌转移，预示了MiR-23a可能作为NSCLC的潜在预后指标及新型的治疗靶点，对于NSCLC患者有一定临床价值。(2)首次提出并证明IRS-1是miR-23a的直接靶基因，IRS-1可有效抑制miR-23a诱导的非小细胞肺癌迁移与侵袭。MiR-23a通过靶向调控IRS-1的表达介导NSCLC的侵袭转移。(3) IRS-1的表达水平与NSCLC患者的总生存期(OS)、无病生存期(DFS)密切相关，IRS-1可作为判断NSCLC患者预后的潜在指标和治疗靶点，为NSCLC的诊断与治疗开拓了新思路。