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目的：建立人增生性瘢痕成纤维细胞系，为下一步试验奠定基础。筛选COLIA1ASODN以阳离子脂质体Oligofectamine为载体转染人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳条件。了解阳离子脂质体介导COLIA1ASODN转染人增生性瘢痕成纤维细胞对COLIA1表达的影响。了解COLIA1ASODN瘢痕内注射对人增生性瘢痕裸鼠移植模型的作用。
结论：所培养的是人增生性瘢痕成纤维细胞，细胞系建立。以阳离子脂质体Oligofectamine为载体进行COLIA1ASODN转染人增生性瘢痕成纤维细胞，转染后ASODN主要分布在细胞核内，不引起细胞凋亡；相对最佳转染条件是接种细胞数量32.25×104个/孔、ASODN浓度150nmol/L、脂质体3μl。在短时间内(8小时)，脂质体表现出对细胞基因表达的影响，到了转染后1天，其作用已消失；脂质体本身对成纤维细胞的COLIA1mRNA和Ⅰ型胶原表达没有抑制作用；在体外细胞水平，COLIA1ASODN有抑制COLIA1mRNA和蛋白表达的作用，而阳离子脂质体作为载体有增强效果。脂质体促进ASODN进入细胞，并在核内分布，阻断了从DNA到mRNA的转录。蛋白表达逐渐上升，提示单次给药不能够满意抑制Ⅰ型胶原蛋白的表达。蛋白表达抑制效果提示每天给药一次可能可以达到较满意的目的。COLIA1ASODN瘢痕内注射有抑制Ⅰ型胶原合成的作用；ASODN和脂质体联合应用，作用增强。每天给药比隔天给药的方法抑制Ⅰ型胶原蛋白表达效果好。提示每天给药的方法可以较满意抑制Ⅰ型胶原蛋白合成。瘢痕硬度的变化落后于核酸和蛋白表达的变化，瘢痕硬度变化趋势和瘢痕内胶原结构、比例、成纤维细胞和胶原超微结构变化以及核酸、蛋白表达变化趋势相吻合，认为该硬度测量仪所得结果可靠，可以用于临床硬度测量，客观定量评估瘢痕进展程度和治疗效果。