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目的:通过负载肿瘤冻融抗原的树突状细胞(DC)预防大鼠卵巢上皮癌发生的体外及体内试验,进行DC疫苗用于卵巢癌防治的可行性研究。
方法:取大鼠四肢骨髓细胞悬液,经密度梯度离心得到大鼠骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNC);应用rrGM-CSF(大鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)、rrIL-4(大鼠重组白细胞介素-4)、rrTNF-α(大鼠重组肿瘤坏死因子-α)体外培养获得成熟DC,形态学观察及流式细胞学进行表型鉴定。诱导BMMNC细胞分化的第3天加入大鼠卵巢癌细胞株NuTu-19的冻融抗原,共培养后获得负载肿瘤抗原(TAA)的成熟DC;将DC与大鼠脾脏分离的T淋巴细胞共同培养,刺激T淋巴细胞增殖并获得细胞毒性T淋巴细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞增殖指数及细胞毒性T淋巴细胞对NuTu-19的细胞毒性作用。将致敏的DC制成DC疫苗经尾静脉注射于大鼠体内,后于大鼠皮下接种NuTu-19细胞,观察大鼠皮下肿瘤的生长情况;并设生理盐水组,NuTu-19冻融抗原组,未致敏DC组进行对照。
结果:大鼠骨髓来源的BMMNC在相关细胞因子的作用下可以培养出成熟的DC,经肿瘤抗原(TAA)致敏后高表达表面抗原OX-62,MHC-Ⅱ,CD-86。TAA致敏的DC在体外试验中可以有效的刺激T淋巴细胞的增殖,诱导生成杀伤性T淋巴细胞(CTL)产生对肿瘤细胞的杀伤作用。TAA致敏的DC疫苗体内试验中肿瘤发生率较低,肿瘤出现时间较晚,肿瘤生长速度较慢,与对照组有显著性差别(P<0.01)。
结论:大鼠骨髓来源的BMMNC可以培养出成熟的DC。DC可负载并提呈肿瘤抗原,体外实验及体内试验均证明负载癌抗原的DC可以杀伤肿瘤细胞,DC疫苗能够对肿瘤的发生起到主动免疫作用,在今后的肿瘤免疫防治方面有着广泛的前景。