肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞用于大鼠卵巢上皮癌免疫预防的体内研究

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目的:通过负载肿瘤冻融抗原的树突状细胞(DC)预防大鼠卵巢上皮癌发生的体外及体内试验,进行DC疫苗用于卵巢癌防治的可行性研究。   方法:取大鼠四肢骨髓细胞悬液,经密度梯度离心得到大鼠骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNC);应用rrGM-CSF(大鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)、rrIL-4(大鼠重组白细胞介素-4)、rrTNF-α(大鼠重组肿瘤坏死因子-α)体外培养获得成熟DC,形态学观察及流式细胞学进行表型鉴定。诱导BMMNC细胞分化的第3天加入大鼠卵巢癌细胞株NuTu-19的冻融抗原,共培养后获得负载肿瘤抗原(TAA)的成熟DC;将DC与大鼠脾脏分离的T淋巴细胞共同培养,刺激T淋巴细胞增殖并获得细胞毒性T淋巴细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞增殖指数及细胞毒性T淋巴细胞对NuTu-19的细胞毒性作用。将致敏的DC制成DC疫苗经尾静脉注射于大鼠体内,后于大鼠皮下接种NuTu-19细胞,观察大鼠皮下肿瘤的生长情况;并设生理盐水组,NuTu-19冻融抗原组,未致敏DC组进行对照。   结果:大鼠骨髓来源的BMMNC在相关细胞因子的作用下可以培养出成熟的DC,经肿瘤抗原(TAA)致敏后高表达表面抗原OX-62,MHC-Ⅱ,CD-86。TAA致敏的DC在体外试验中可以有效的刺激T淋巴细胞的增殖,诱导生成杀伤性T淋巴细胞(CTL)产生对肿瘤细胞的杀伤作用。TAA致敏的DC疫苗体内试验中肿瘤发生率较低,肿瘤出现时间较晚,肿瘤生长速度较慢,与对照组有显著性差别(P<0.01)。   结论:大鼠骨髓来源的BMMNC可以培养出成熟的DC。DC可负载并提呈肿瘤抗原,体外实验及体内试验均证明负载癌抗原的DC可以杀伤肿瘤细胞,DC疫苗能够对肿瘤的发生起到主动免疫作用,在今后的肿瘤免疫防治方面有着广泛的前景。
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