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戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus，HEV)是一种无囊膜的单股正链RNA病毒，能引起人和动物的戊型肝炎，主要经粪-口途径传播。HEV可分为哺乳动物HEV和禽HEV，哺乳动物HEV可引起人的急性肝炎，猪和其他哺乳动物作为携带者，体内也存在大量该类病毒；禽HEV仅感染禽类，可引起鸡的肝脾肿大综合症。哺乳动物HEV有4个基因型，基因1型和2型仅感染人类，而基因3型和4型感染人和动物。
本研究，根据GenBank中登录的HEV序列，在其ORF2保守核苷酸序列区间设计合成了两对HEV兼并引物，组成一套巢氏PCR引物，对在广东各地区40多个猪场采集的213份肝脏、胆汁和粪便样品进行HEV的检测，结果在10份胆汁和3份粪便样品中扩增出HEV ORF2目的片断。通过对扩增出的HEV核苷酸片断进行了序列的测定和分析，发现获得的13个ORF2基因片断相似性在84.2％～100%之间，并通过与国内外4个基因型HEV进行相应核苷酸序列的相似性比对，结果发现它们与基因1型的相似性在76.1%～81.3%之间；与基因2型的相似性在76.5%～79.4%之间；与基因3型的相似性在75%～81%之间；与基因4型的相似性最高，为81.6%～98.9%。初步推测，广东地区猪群中存在的HEV基因型以4型为主，与国内猪群中主要流行的HEV基因型相一致。
本研究用A549细胞对上述13份阳性病料进行了HEV的分离，结果在一份病料接种的传代细胞中连续4代检测到HEV核酸，并且通过间接免疫荧光试验在第四代A549细胞上检测到绿色荧光信号，表明有HEV在A549细胞中获得了增殖，将该株细胞毒命名为HEV-SS19。作者设计了24条巢氏PCR引物和4条RACE引物，扩增HEV-SS19的全基因组序列。经序列分析，表明HEV-SS19具有基因4型HEV的特征性基因组结构，且与国内猪源分离株swGX40的同源性最高。
本研究分析了HEV-SS19 ORF2的核苷酸和氨基酸序列，筛选出ORF2中抗原性较强的基因片段(dORF2，946～2025nt)，设计PCR引物，将其克隆到原核表达质粒pET-32a(+)中，构建重组质粒pET-dORF2，然后通过转化工程菌BL21，经IPTG诱导获得dORF2的原核表达，表达的融合蛋白分子量约为59KD，并对原核表达产物(pdORF2)进行了相关特性分析和Western-Blot鉴定。结果显示pdORF2有部分以可溶的形式存在，而且可与猪血清中的HEV发生抗体特异性结合，具有较好的抗原性。
本研究最后还用上述原核表达的蛋白作为包被抗原，建立一种间接ELISA方法检测猪血清中的HEVIgG抗体。通过各ELISA条件的优化，结果表明pdORF2的最佳包被浓度为4.75ug/mL，HRP标记的鼠抗猪Ig(H+L)的最佳稀释度为1:2000，血清的最佳稀释度为1:40。重复性试验和特异性试验结果表明本研究建立的ELISA方法重复性好，特异性强。选取91份猪血清，通过与北京万泰公司生产的双抗原夹心法HEV-Ab ELISA试剂盒比较，结果表明本研究中的间接ELISA方法检测到59份阳性，双抗原夹心ELISA方法检测到57份阳性，共同阳性数为54，共同阴性数为29，总符合率为91.2%。