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本论文由两部分组成,第一部分是激活丝苏氨酸磷酸酶PP2Cα阻断肝纤维化的机制研究;第二部分是核受体FXR与内质网应激反应元件结合调控未折叠蛋白反应靶基因的转录研究。
在肝星状细胞中TGFβ信号通路的过分活化以及肝星状细胞的大量增殖在肝纤维化的生成中具有重要的作用,而蛋白丝苏氨酸磷酸酶PP2Cα被报道能够负调控TGFβ和细胞周期信号通路。我们这项研究就是探索PP2Cα在肝纤维化生成中的作用。在肝星状细胞以及小鼠肝纤维化模型中,我们分析了PP2Cα的激活对肝纤维化的影响。结果发现用PP2Cα的小分子激动剂NPLC0393处理细胞不仅能够阻断TGFβ通路,抑制胶原蛋白的表达,而且能够显著减少肝星状细胞的数量,在肝纤维化小鼠模型中NPLC0393也体现了有效的抗纤维化效果。该项研究提示激活PP2Cα或可成为肝纤维化治疗的新策略,而天然产物NPLC0393或可用于抗肝纤维化的药物研发中。
本论文的第二部分主要是研究核受体FXR与内质网应激反应元件结合调控未折叠蛋白反应靶基因的转录研究。FXR是胆汁酸激活的核受体,它在胆固醇、胆汁酸、以及糖脂代谢中都具有重要的作用。在本研究中,我们发现FXR能够通过与内质网反应元件结合而调控以GRP78,CHOP,XBP1为代表的未折叠蛋白反应靶基因(UPR)的转录。Western实验结果显示FXR被其内源性配体CDCA或者外源性受体GW4064激活后能够在HepG2细胞、人肝原代实质细胞以及野生型小鼠中诱导GRP78,CHOP,以及XBPl的表达。Luciferase实验结果显示CDCA和GW4064对GRP78,CHOP以及XBP1的诱导作用是通过激活其启动予中的ERSE的活性来实现的。而染色质免疫共沉淀以及SPR实验结果显示FXR能够与ERSE直接结合。最后,FXR siRNA沉默实验以及FXR敲除的小鼠的实验结果显示CDCA和GW4064诱导的GRP78,CHOP以及XBP1的表达是依赖于FXR的。总之,我们的结果首次提供了代谢相关的转录因子能够直接调控UPR靶基因的证据。