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丙型肝炎病毒(HCV)是引起丙型肝炎的病原因子，对HCV感染目前尚无有效的疫苗及治疗手段。E1蛋白作为HCV的外膜蛋白，是宿主免疫系统攻击的主要目标，引起宿主较强的体液和细胞免疫反应，对该蛋白进行深入研究，不仅是HCV病原学研究所必需的，而且能为HCV感染的诊断、预防、治疗提供有价值的线索和依据。为此，我们选取HCV E1区基因作为研究对象，进行了基因克隆、蛋白表达及B-细胞抗原表位研究。 一、HCV E1区基因的克隆及表达：丛二份HCV感染者血清中提取病毒RNA，经反转录、半巢式PCR扩增出E1区基因，将PCR产物直接与pQE-30载体相连，在E．coli M15中进行诱导、表达，在随机挑取的86个阻性克隆中，11株表达了长短不同的蛋白，但没有一株表达全长E1蛋白的克隆。对表达蛋白分子量最大的插入E1基因(HCVe118)进行测序。结果显示：(1) 该基因与HCV Ⅰ-Ⅵ型代表株DNA同源性为56.3％-96.9％，所编码的氨基酸同源性为47.7％-97.5％，其中和HCV Ⅱ／1b型同源性最高，进化树的分析表明，我们克隆的HCV基因属于HCV Ⅱ／1b型；(2) 该E1基因中由于1347位的C→T而形成终止密码，表达了C-末端截断的E1蛋白。用“大引物”法对HCVe118作定点突变，使T→C，从而获得具有正确框架的HCV E1基因，将该基因导入同样的原核系统，没有获得表达，又选取一株没有表达的阳性克隆进行测序，结果表明，其插入的E1基因核酸序列与HCVe118改构后的一样，为完整的E1