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银屑病是一种常见的多因素诱导的炎症性慢性皮肤病,发病率高,发病机制复杂,很难根治。目前认为其主要是由辅助性T细胞(Th细胞)为主介导的一种自身免疫性疾病,多种炎症细胞及细胞因子参与其中。角质形成细胞(Keratinocyte)在表皮形成中起到非常重要的作用,并且角质形成细胞能够分泌角质蛋白,那么在银屑病中角质形成细胞会发生怎样的改变?研究报道在银屑病患者皮损处,角质形成细胞所表达的角蛋白谱会发生改变,其中包括作为“银屑病增殖相关角蛋白”的角蛋白17(Keratin17)表达水平显著升高。Keratin17在正常皮肤中表达量很低或不表达,但在银屑病患者的皮损处则是高表达,同时其表达水平与银屑病发病过程和严重程度密切相关。在银屑病发生发展过程中可能存在“自身反应性T细胞——细胞因子——K17”作用环路。在这个环路中自身反应性T细胞被角蛋白17激活,从而分泌细胞因子如白介素22(IL-22)、γ-干扰素(IFN-γ)等,这些炎症因子不仅能够上调K17的表达,还能引发局部的表皮增生和免疫炎症反应;这将引起自身反应性T细胞进一步激活,形成一个正反馈环路,促进银屑病的发生发展。大多数银屑病患者采用局部治疗,目前治疗银屑病的药物主要有维生素D3类似物、免疫抑制剂、皮质类固醇等,但这些类药物并没有取得理想的效果。所以,如何最大程度的发挥现有药物的局部治疗作用,已成为药物研发的严峻考验。而牛蒡子苷元(Arctigenin)是从菊科植物牛蒡的果实牛蒡子中分离出来的木脂素单体,现代药理学证明牛蒡子苷元有抗炎,抗肿瘤,抗氧化,降血糖以及抑制T细胞增殖的作用等多重功效,但尚无将该药用于慢性皮肤性疾病的报道,此外如果能局部治疗有效,可以尽快实现该药的临床转化,减少潜在的肝毒性对机体的影响。咪喹莫特是一种咪唑喹啉类小分子免疫调节剂,主要作用是抗尖锐湿疣、肛周疣、日光性角化病及基底细胞癌等。咪喹莫特乳膏作用于皮肤时可以引起皮肤的多种免疫学改变,目前是世界上比较公认的建立银屑病模型的药物。因此,本课题拟利用咪喹莫特诱导构建银屑病病理模型,并在此基础上观察牛蒡子苷元对其治疗作用并探讨可能的机制。目的:观察牛蒡子苷元对咪喹莫特诱导的银屑病样皮肤病的治疗效果;探讨牛蒡子苷元对KC细胞表达K17的影响及其具体分子机制。方法:1)观察不同渗透促进剂对牛蒡子苷元渗透性的影响,筛选渗透性较好的促进剂制备牛蒡苷元乳膏;2)采用咪喹莫特诱导银屑病样皮肤模型,并用牛蒡子苷元乳膏进行涂抹治疗;3)通过HE染色观察组织结构变化,并分析其疾病严重程度;4)取银屑病小鼠的病变组织进行RT-PCR、western-blot检测,分析牛蒡子苷元对咪喹莫特诱导的银屑病样皮肤模型的K17表达的影响;5)采用MTT法检测不同浓度的牛蒡子苷元对KC细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测牛蒡子苷元对KC细胞周期和凋亡的影响;6)用IFN-γ和TNF-α刺激KC细胞,建立K17高表达模型,然后用牛蒡子苷元进行处理,24h后通过实时定量PCR、western-blot检测K17的表达变化。结果:制备出渗透性较好的牛蒡子苷元乳膏;成功构建了咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型;牛蒡子苷元能够明显改善疾病严重程度;与模型组相比,牛蒡子苷元治疗组K17的蛋白表达水平明显降低,而AMPK的磷酸化水平升高。牛蒡子苷元可抑制KC细胞的增殖,阻滞其周期进程,促进KC细胞的凋亡,并呈剂量依赖性。300U/m LIFN-γ和500ng/m L TNF-α刺激使KC细胞中K17 m RNA及蛋白表达水平显著升高,且IFN-γ和TNF-α处理浓度与K17的表达量之间存在显著正相关;而牛蒡子苷元处理组,IFN-γ和TNF-α诱导的K17上调明显受到抑制。结论:牛蒡子苷元能够减缓咪喹莫特诱导的银屑病样皮肤发展,其机制可能是通过抑制KC细胞的增殖,促进KC细胞的凋亡。牛蒡子苷元能够下调K17的表达,其可能的调控机制是通过激活AMPK来实现的,说明牛蒡子苷元对银屑病的治疗作用可能与K17有关。本课题系统观察了牛蒡子苷元对银屑病样皮肤的治疗效果,并进一步阐明其可能的分子机制,为将该药应用于临床提供了理论依据。