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目的：
microRNAs(miRNAs)是一长度约为18～25个核苷酸的非编码小RNA,在转录后水平调节基因的表达。miRNA调节多种生物过程,不仅在生理情况下而且在病理情况下,如细胞的增殖、死亡、凋亡、分化以及基因的稳定性等,现已发现许多miRNA直接与癌症相关,如肺癌、乳腺癌、肝癌、结肠癌以及白血病等。miRNA在肿瘤的发生发展中起着重要的作用,发挥着相当于癌基因或抑癌基因的作用。
卵巢恶性肿瘤是一种常见的女性生殖器肿瘤,其死亡率占据妇科肿瘤的第一位。目前发现很多miRNAs在卵巢癌中异常表达,miR-140,miR-145和miR-21是发现比较早的几个在卵巢癌中异常表达的miRNAs,而且进一步证实,它们在卵巢癌的发展过程中也发挥了重要的作用。miR-210在卵巢癌中异常表达,调节E2F3蛋白水平,在卵巢癌发病中起关键作用。WymanSK等发现miR-152在卵巢癌组织中表达下调。越来越多的研究表明,miKNA与卵巢癌有着非常密切的关系。随着研究的不断深入,miRNA在卵巢癌的基因诊断和治疗中将发挥重要的作用。
在本研究中,我们参考国内外相关文献及前期关于卵巢癌的miRNA表达谱的研究,初步确定miR-152为我们的研究重点。利用real-time PCR技术检测了卵巢癌细胞系OVCAR3相对于正常卵巢组织中miR-152的表达,通过使卵巢癌细胞中过表达miR-152,初步探索其在卵巢癌的发生、发展中的作用。
方法：
一、miR-152在正常卵巢组织及卵巢癌细胞系中的表达
我们选择卵巢癌细胞系OVCAR3及17例正常卵巢组织手术标本,经提取RNA,加尾,抽提纯化,反转录后得到cDNA模板,运用real-time PCR检测miR-152相对于正常卵巢组织的表达量,如果相对表达量小于1,则被认为是低表达。反之,被认为是高表达。
二、miR-152对细胞增殖的影响
向卵巢癌细胞系中(OVCAR3)转染miR-152 mimics,使miR-152在卵巢癌细胞中过表达,通过MTT及细胞计数生长实验检测转染miR-152 mimics后对细胞增殖的影响。
结果：
一、miR-152在卵巢癌细胞系中的表达
real-time PCR结果显示,miR-152在人卵巢癌细胞系OVCAR3中较正常卵巢组织呈低表达(p＜0.01)。
二、miR-152对细胞增殖能力的影响
OVCAR3在转染了miR-152 mimics后,经real-time PCR检测验证,转染了miR-152 mimics的实验组细胞中,miR-152的表达水平较对照组有所提高。应用MTT法绘制的生长曲线及细胞计数生长曲线表明,对于OVCAR3细胞系,转染了miR-152mimics实验组的细胞从48小时开始其增殖速率明显低于阴性对照及空白对照组(p＜0.05)。
结论：
1、卵巢癌细胞系OVCAR3中,miR-152的表达量显著低于正常卵巢组织对照组。
2、miR-152的过表达抑制了卵巢癌细胞OVCAR3的增殖。