【摘 要】
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炎症性肠病(IBD)的发生，被认为是遗传、环境和黏膜免疫三方面因素共同作用的结果，而肠黏膜异常的免疫应答又是发病的关键因素之一。在炎症局部，炎性细胞的招募和激活依赖各种细
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炎症性肠病(IBD)的发生，被认为是遗传、环境和黏膜免疫三方面因素共同作用的结果，而肠黏膜异常的免疫应答又是发病的关键因素之一。在炎症局部，炎性细胞的招募和激活依赖各种细胞膜受体及整合素与细胞基质(ECM)间的相互作用。细胞外基质蛋白Mindin是Mindin/F-spondin家族成员，在小鼠炎症模型中，有多项研究表明Mindin在免疫应答过程中扮演重要角色，但对于其在炎症中的功能和调控机制研究较少。故本课题拟探索肠炎中Mindin的表达水平及其在炎症中的信号调控机制。 本课题研究中，我们给予C57BL/6小鼠3％的DSS溶液构建急性肠炎模型，提取模型小鼠肠道组织mRNA，通过实时定量PCR发现Mindin及NF-κBp65 mRNA表达同对照组相比呈明显上调。为了明确肠炎中NF-κB p65的表达上调是否是由Mindin诱导所引起，我们构建了Mindin过表达的质粒及pNF-κB-luc质粒，应用双荧光素酶检测系统进行检测，结果显示NF-κB p65启动子的转录活性在Mindin过表达及CpG-ODG的刺激下明显增加。为了更深一步探索Mindin在炎症中的调控机制，我们通过生物信息学预测及免疫共沉淀等方法初步证实CR3(CD11b/CD18)为Mindin的膜结合蛋白，并确定结合部位为Mindin的FS结构域，进而，我们利用Mindin重组蛋白刺激RAW246.7和CMT93细胞，通过核浆分离免疫印迹证实Mindin可促进NF-κB p50的核转位。最后我们通过分离小鼠腹腔单核细胞，在Mindin蛋白的刺激下行荧光微球吞噬试验，结果显示在Mindin蛋白的刺激下小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能明显增强。 综上，我们得出结论:Mindin mRNA在肠炎中表达上调，且可通过TLR-9介导的方式上调NF-κB p65的转录活性;此外Mindin可与CR3(CD11b/CD18)共结合，结合部位为Mindin的FS结构域，Mindin可能通过与CR3的相互作用促进NF-κB p50的核转位，进而激活炎性细胞，促进炎症。我们的结果提示Mindin可能作为治疗克罗恩病的潜在靶点，为临床应用提供了理论基础。
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