【摘 要】
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目的分析成年豚鼠新皮质浅层细胞体外增殖和分化潜能,探讨新皮质浅层存在成年神经发生的可能性。方法分离不同年龄段豚鼠不同部位脑组织,包括新皮质浅层、深层以及海马脑组织
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目的分析成年豚鼠新皮质浅层细胞体外增殖和分化潜能,探讨新皮质浅层存在成年神经发生的可能性。方法分离不同年龄段豚鼠不同部位脑组织,包括新皮质浅层、深层以及海马脑组织,体外悬浮培养、扩增及传代,比较不同年龄、不同部位组织来源的神经球样细胞簇形成率的差异；用Nestin免疫荧光染色进一步检测成年豚鼠皮质浅层分离出的细胞是否具有神经干/祖细胞的特性；去除生长因子后,用胎牛血清和NGF诱导成年豚鼠新皮质浅层神经干/祖细胞进行分化,通过免疫荧光染色检测神经元标记物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形胶质细胞标记物GFAP的表达；并应用膜片钳技术对诱导分化后神经元的电生理功能进行检测。结果所取的豚鼠脑组织细胞在体外可以形成集落样生长的神经球,几乎整个神经球均由Nestin阳性细胞组成,部分神经球细胞共表达GFAP。诱导分化后的细胞显示不同比例的神经元标记物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形胶质细胞标记物GFAP染色阳性。膜片钳检测可见诱导分化后的神经元具有典型的Na+-K+电流及持续的动作电位。随着年龄增长,海马区克隆形成率逐渐降低,皮质区克隆形成率并没有明显的年龄相关性。结论原代培养形成的神经球样细胞簇具有良好的细胞状态和增殖能力。豚鼠海马区细胞的克隆形成能力有随着其年龄增长呈现递减趋势,而皮质区克隆形成率却没有明显的年龄相关性。成年豚鼠新皮质浅层细胞能够体外增殖,并且能够分化为星形胶质细胞和具有生理功能的神经元,该区可能为潜在的神经发生区。图9幅,表0个,参考文献49篇。
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