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紫杉醇是从红豆杉科红豆属(Taxus)植物中提取分离得到的一种含有一个紫杉烷环的双萜类抗肿瘤药物,通过独特的微管抑制作用抑制细胞复制,阻止癌细胞增殖。由于其水中溶解度很低,市售制剂采用会引起过敏反应的辅料Cremophor EL作为增溶剂提高其溶解度,给临床带来严重的安全性问题和不便。本课题对脂质体作为紫杉醇的增溶系统进行了初步研究,有望在保持原有制剂药效的前提下提高其安全性。
本文第一部分为紫杉醇脂质体的处方和工艺研究。首先建立了RP-HPLC法测定紫杉醇脂质体中药物含量,方法可靠。尝试几种常规脂质体制备方法制备紫杉醇脂质体后,选择成膜水化-探头超声法小规模制备紫杉醇脂质体,所得脂质体平均粒径小于100nm。以粒径、载药量为指标,单因素考察了脂质体的制备过程并优选了较佳工艺。以粒径、载药量为指标,对脂质体处方进行单因素考察,并使用析因设计优化了紫杉醇脂质体处方。在此基础上,将成膜规模放大到60倍,初步探讨了高压均质法大规模制备紫杉醇脂质体的工艺条件,结果表明压力为15000psi时,5个循环可以制得粒径小于100nm的紫杉醇脂质体。最后筛选了9％蔗糖作为脂质体冻干保护剂并确定初步冻干工艺。结果表明,本课题制备的紫杉醇脂质体粒径符合课题设计要求、载药量较高,可以大规模制备。
本文第二部分为紫杉醇脂质体的理化性质和初步稳定性研究。按照中国药典附录脂质体制剂要求,以超滤离心法结合RP-HPLC测定紫杉醇脂质体包封率,方法可靠快捷。测得水化后紫杉醇脂质体包封率大于99％。水化后电镜下脂质体为小单室,粒径分布不均匀。粒径检测结果表明水化后平均粒径小于100nm,99％小于300nm,无大于1μm粒子。高压均质法制得脂质体比超声法更均匀。紫杉醇注射剂与5％葡萄糖注射剂配伍稳定,24h内粒径与包封率均未发生明显改变。紫杉醇脂质体冻干品充氮绝氧密封后进行稳定性研究,影响因素试验表明,高温、强光条件下粒径变大,药物含量下降,有关物质增加,磷脂中过氧化物增加。提示紫杉醇脂质体应密闭低温避光保存。加速3月试验表明脂质体稳定性良好,4℃避光留样已3月,稳定性良好。
本文第三部分为紫杉醇脂质体大鼠体内药物动力学研究。首先建立RP-HPLC方法,以地西泮为内标测定大鼠血浆中紫杉醇的浓度。结果表明,紫杉醇制成脂质体静注后血中浓度下降趋势与注射剂基本一致；各药动学参数经方差分析,消除速率常数t1/2β从2.49h延长到3.38h,体内滞留时间MRT0～8h从1.96h延长到2.29h,均有显著性差异(P<0.05),其他各参数均无显著性差异(P>0.05)。以市售Anzatax为参比制剂,紫杉醇脂质体的生物利用度为88.13％。
本文第四部分为紫杉醇脂质体小鼠体内组织分布研究。首先建立RP-HPLC方法,以地西泮为内标测定小鼠各脏器中紫杉醇的浓度,方法可靠灵敏。对各脏器8小时内各时间点紫杉醇浓度数据进行方差分析表明,紫杉醇包封进入脂质体后,肝和肾药物浓度在5min时间点有显著性提高(P<0.05),其他时间点大多无存在显著性差异(P>0.05),且所有脏器中药物浓度升高最大不超过对照组的2倍。以梯形法计算各脏器紫杉醇蓄积,AUC数据表明,紫杉醇包封进入脂质体后,肝脏AUC0→8h仅仅提高34％,脾脏AUC0→8h提高6％,并未在肝脾脏器造成大量蓄积,但在子宫卵巢蓄积降低69％,而在心脏蓄积降低42％,从而初步保证了用药安全。
第五部分为紫杉醇脂质体急性过敏反应和最大耐受量试验。结果表明紫杉醇脂质体的急性过敏反应为0级,即无过敏反应发生。单次给药最大耐受量大于48mg·kg-1。与普通紫杉醇注射液相比,紫杉醇脂质体不使用Cremophor EL,所以大大降低了普通注射液的毒性,临床上有望提高给药剂量以及缩短滴注给药时间。