磁共振成像对内皮素-1在犬迟发脑血管痉挛模型中作用的评价

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目的:内皮素作为含21个氨基酸残基的多肽被认为是目前已知作用最强的缩血管因子,与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的发生有密切关系,本课题试图对家犬脑血管痉挛模型进行影像学和形态学的观察,掌握模型制作要领,明确模型特征,为实验研究奠定基础;通过测量家犬模型一系列MRA图像上基底动脉的横径,得出其血管痉挛曲线,对比经放免测定的血浆和脑脊液中ET-1的水平,明确痉挛程度与内皮素水平的相关性,并进一步阐明ET-1在脑血管痉挛中的作用以及磁共振在诊断蛛网膜下腔出血后迟发脑血管痉挛中的作用。材料与方法:健康家犬9只,体重10-15公斤,用2%戊巴比妥钠按50mg/kg将动物麻醉。用9#腰椎穿刺针经环枕缝刺入蛛网膜下腔,按0.5ml/kg放出脑脊液,然后,穿刺股动脉,抽出动脉血(不加抗凝剂),按0.5ml/kg经腰椎穿刺针以2ml/min的速度注入蛛网膜下腔。将动物置头低足高位与地面呈30o角,30分钟后动物模型制作完成。磁共振扫描序列包括自旋回波T1(SE-T1)、快速自旋回波T2(FSE-T2)、液体衰减反转恢复序列(FLAIR)、三维时间飞跃法MR动脉成像(3DTOF-MRA)及弥散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)。磁共振扫描时间分别为:制作模型前、制作模型后、术后第2天、第4天、<WP=4>第6天、第8天、第10天、第12天和第14天。磁共振检查发现血管痉挛后,立即准备进行DSA检查。 经静脉留置针抽取静脉血2ml,置已加入EDTA抗凝剂30ul和抑肽酶20ul的试管中,以每分钟3000转的速度离心15分钟,取上清检测。抽取脑脊液1ml置于加入20ul抑肽酶的试管中。将血浆和脑脊液样本封口置-70℃超低温冰箱中保存,待全部样本收集完成后送检。 造模后第4天和第14天,将动物麻醉,灌注固定,取出完整脑组织,观察基底动脉周围血块包围情况。标本行常规光镜观察及免疫组化染色。观察对比正常基底动脉、造模后4天和造模后14天基底动脉内膜,内弹力膜与平滑肌纤维的变化。 对比一系列MRA图像,并与DSA图像对比,得出基底动脉痉挛的程度、范围及出现痉挛时间。对比一系列T1、T2、FLAIR以及DWI图像,是否有异常信号。 采用方差分析法比较痉挛前后脑脊液和血浆中ET-1的水平、痉挛前后免疫组化结果。将MRA结果与ET-1水平对照,观察它们之间是否存在相关关系。 结果:大体标本见基底动脉周围,脑干腹侧面有近似黑色血块包绕,HE染色片显示正常基底动脉管壁光滑,厚薄均匀。造模后4天基底动脉管腔变小,厚薄不均匀,内弹力膜皱缩呈不规则锯齿状,管壁周围有大量红细胞包围。免疫组化片显示造模后4天基底动脉内膜阳性细胞多,着色深。正常和造模后14天基底动脉内膜阳性细胞较造模后4天者少,着色较前者浅。MRA显示基底动脉痉挛发生于造模后2-4天,平均3天。各组血浆及脑脊<WP=5>液中ET-1值经统计学处理无显著差异(P值分别为0.052、0.404)。结论:1.将ET-1看作是SAH后DCVS所致颅内缺血性改变的一种产物比把它当作SAH后导致DCVS的诱因更能准确的反映它在SAH后的作用;2.MRA图像能比较准确的显示血管痉挛的程度,DWI图像能尽早的显示颅内缺血性改变,因此,磁共振成像是评价SAH后DCVS程度和DCVS导致神经病变的重要手段。
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