论文部分内容阅读
[目的]探讨活性氧(ROS)对ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱。[方法]体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV304)，实验分AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组。采用改良MTT法、Fenton反应和硝酸酶还原法分别观察不同浓度AngⅡ在4h、12h和24h时对ECV304细胞的增殖率和细胞产生ROS(·OH和NO)的量。应用基因芯片技术和光镜分别检测0.0625和1μmol／L AngⅡ作用12h时ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱和细胞形态学变化。[结果]实验结果发现：①一定浓度的Ang Ⅱ(0.03125—1μmol／L)作用12h时ECV304细胞增殖率增加，明显高于NAC干预组和正常对照组(P＜0.05)，0.0625μmol／LAng Ⅱ对细胞增殖作用最为显著。10mmol／L NAC可抑制1μmol／L Ang Ⅱ对ECV304细胞的增殖作用，与正常对照组相比无显著性差异(P＞0.05)，Ang Ⅱ作用24h时，随浓度增加，ECV304细胞出现负增殖；②统计学相关分析显示，ROS(·OH)的含量与ECV304细胞增殖率呈显著负相关(r=-0.8，P＜0.01)；③基因芯片技术分析显示，在0.0625μmol／L Ang Ⅱ作用ECV304细胞12h时，与细胞增殖相关的ERK、CDK、CCN、PCNA等25个基因普遍上调，而与细胞凋亡相关的DR6、Caspases6、BAK1、PDCD8等12个基因普遍下调，在1μmol／LAngⅡ作用12h时，呈相反结果。[结论]①AngⅡ可诱导ECV304细胞产生ROS(·OH)，ROS(·OH)含量与Ang Ⅱ呈时间和剂量依赖性。②一定量的ROS(·OH)与ECV304细胞的增殖率呈显著负相关。③一定量的ROS(·OH)可引起多种与ECV304细胞增殖相关的靶基因表达。④抗氧化剂NAC可以减少ECV304细胞ROS(·OH)的含量，明显抑制Ang Ⅱ对ECV304细胞的增殖作用。⑤ROS(·OH)可能是AngⅡ诱导ECV304细胞增殖的主要信号转导分子和基因表达调节分子。