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H5N1与H7N9亚型禽流感病毒通过不断变异已经能够对人类进行跨种传播,对人类的生命安全依然存在着潜在的威胁。为了研究AIV的主要抗原HA的特点,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达H5N1与H7N9亚型流感病毒HA蛋白,并对其进行鉴定和初步的免疫原性研究。首先将H5N1与H7N9亚型禽流感病毒的HA蛋白基因扩增并克隆到pFastBac1载体中,构建重组穿梭质粒;转染昆虫sf9细胞后获得重组杆状病毒,对其进行大量培养。对表达的H5N1与H7N9 HA蛋白进行SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光等方法进行检验。为了检测所表达H5N1与H7N9 HA蛋白的免疫原性,本研究进行了初步的小鼠体内实验,分别在0d和14d将纯化的HA蛋白进行小鼠免疫,并在免疫两周后进行H5N1流感病毒攻毒试验,记录小鼠体重变化及生存率。结果:H5N1与H7N9在SDS-PAGE结果显示纯化的蛋白在还原SDS-PAGE中表现为相对分子质量为65KDa与67KDa;免疫印迹分析表明,纯化的H5N1HA蛋白与H7N9HA蛋白能够分别与兔抗IgG和鸡抗IgG特异性结合;抗WIV鸡血清和鼠抗为抗体的间接免疫荧光测定HA蛋白的表达,均在感染HA的昆虫细胞中发现特异性的荧光,但是在正常的昆虫细胞中没有发现。H5N1亚型禽流感病毒的小鼠攻毒试验表明表达的HA蛋白能够在小鼠体内诱导产生免疫应答并且逃避H5N1流感病毒的致死性攻击。本研究成功表达了H5N1与H7N9亚型禽流感病毒的HA,为进一步了解H5N1与H7N9禽流感病毒奠定了基础,也为亚单位疫苗的研究提供了技术支持。