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下咽癌是头颈部鳞状细胞癌中恶性程度较高的肿瘤之一,由于发病位置隐蔽,发现时多数已为中晚期,患者的5年生存率仅为30%-50%,传统的手术方法由于不能保留喉器官,导致患者的生存质量下降.以器官保留为目的的放化疗并不能提高患者生存期,5年生存率仍处于40%-60%.近年来人们提倡手术联合放化疗以提高患者生存率和生活质量,临床上比较常用的化疗药物包括顺铂(cisplatin DDP),5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil5-FU),多柔比星(doxorabicin Dox),和长春新碱(vincristine VCR)等。但是,随着化疗药物的应用,肿瘤细胞逐渐出现了多药耐药性(multidrug resistance, MDR),从而降低了治疗效果。紫杉醇作为新一代化疗药物在晚期或复发下咽癌中被广泛应用并取得较好的疗效,研究表明其临床试验疗效高于其他传统化疗药物。尽管如此,肿瘤细胞对紫杉醇产生的耐药性仍然是其发挥作用的最大障碍。为进一步了解下咽癌细胞对紫杉醇的耐药机制,我们通过用紫杉醇诱导下咽癌细胞株FaDu的方法建立其多药耐药细胞株FaDu/T.通过比较两种细胞株间多药耐药蛋白ABCB1和ABCG2表达变化及JNK信号转导途径在这种变化中的作用,进一步揭示了下咽癌的多药耐药及调控机制,并为临床治疗下咽癌提供理论支持。目的1.检测FaDu/T细胞的多药耐药性。2.检测多药耐药蛋白ABCB1,ABCG2分别在FaDu和FaDu/T细胞系中的不同表达。3.探讨JNK信号转导途径在ABCB1及ABCG2变化表达中的作用,为进-步逆转下咽癌细胞的多药耐药性奠定理论基础。材料与方法以人下咽癌细胞株FaDu为亲本细胞,采用浓度梯度递增法成功建立下咽癌细胞株FaDu的耐紫杉醇细胞株FaDu/T,紫杉醇的起始用药浓度为FaDu的IC25：5×10-9mol/L,截止实验时耐药浓度为200×10-9mol/L,整个过程持续约14个月。四甲基偶氮唑蓝法(Methyl-Thiazolyl-Tetrazolium MTT)分别检测FaDu和FaDu/T对DDP,5-FU, Dox,和VCR的多药耐药性,IC50软件分别计算出其半数致死率；多药耐药基因及蛋白ABCB1及ABCG2表达变化情况分别通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR), Western blotting和激光共聚焦检测；FaDu/T细胞中茴香霉素(Anisomycin)的加入前后不同时间JNK信号转导通路相关蛋白的表达变化通过Western blotting检测。结果1. FaDu细胞的耐紫杉醇细胞株FaDu/T成功建立,FaDu/T细胞可以在含有紫杉醇的培养基中正常生长。2.耐药细胞株FaDu/T比FaDu细胞具有更强的多药耐药性。3.与FaDu细胞相比,FaDu/T细胞株中多药耐药基因和蛋白ABCB1的表达增加但ABCG2表达下降。4.紫杉醇初始作用于FaDu细胞后JNK信号转导通路被激活,但是在FaDu/T细胞中JNK信号转导通路呈失活状态,MAPK信号转导通路的激活剂茴香霉素(Anisomycin)则可以使FaDu/T细胞的JNK信号通路重新激活。5.耐药细胞株FaDu/T中加入Anisomycin时ABCB1表达下调,ABCG2的表达升高,但是在预先加入JNK特异性抑制剂SP600125的FaDu/T细胞株中加入Anisomycin时,ABCB1和ABCG2的表达无明显变化,提示JNK信号通路在下咽癌的多药耐药过程中具有重要的调控作用。结论1.多药耐药蛋白ABCB1在FaDu/T细胞的高表达是其产生多药耐药的重要原因。2.紫杉醇通过JNK信号转导通路影响多药耐药蛋白ABCB1和ABCG2表达3.各种耐药蛋白交替变化表达从而对不同的化疗药物产生耐药性是导致临床肿瘤化疗失败的重要原因。