【摘 要】
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轮状病毒是引起小儿腹泻的主因。全球每年有超过1.25亿婴幼儿腹泻是由轮状病毒引起的,并造成超过60万婴幼儿的死亡,且大部分死亡病例都发生在不发达的亚非国家。针对轮状病毒
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轮状病毒是引起小儿腹泻的主因。全球每年有超过1.25亿婴幼儿腹泻是由轮状病毒引起的,并造成超过60万婴幼儿的死亡,且大部分死亡病例都发生在不发达的亚非国家。针对轮状病毒的治疗目前还没有特别有效的治疗药物,因此预防轮状病毒就显得至关重要;而预防轮状病毒最有效的方法就是研制轮状病毒疫苗,因此研制安全、广谱、高效的轮状病毒疫苗就成为当今各国政府及世界卫生组织(WHO)极为重要的任务。目前TCID50法是常用的检测轮状病毒感染力和轮状病毒中和抗体的方法,但由于TCID50法耗时长、主观误差大、工作量大等原因,限制其在大规模的筛选和试验中应用。因此建立一种快速、高效、准确的轮状病毒和轮状病毒中和抗体的检测方法对轮状病毒的病毒学研究和轮状病毒疫苗的开发都具有重要的作用和意义。
本论文建立了轮状病毒的分离,鉴定和扩大培养的方式,通过收集和分离培养不同的轮状病毒为以后的轮状病毒病毒学研究做准备。同时建立了一种新型的快速、高效轮状病毒及轮状病毒中和抗体的检测法——酶联免疫斑点法,该方法是以酶联免疫斑点法和ELISPOT自动化扫描仪为基础,借助针对针对轮状病毒结构蛋白VP6的特异性酶标抗体7H11和VP6的特异性反应,通过TMB显色反应以区别感染和未感染细胞来实现检测的;在本论文中还从可靠性,稳定性等方面对建立的轮状病毒酶联免疫斑点法进行验证,通过对比发现新建立的轮状病毒酶联免疫斑点法不仅具有快速、可靠、准确等特点,而且还和传统的TCID50检测法具有很好的相关性。新建立的轮状病毒酶联免疫斑点法不仅可以用于轮状病毒中和抗体的检测还可以用于轮状病毒感染力的检测,同时在该论文中我们还以新建立的轮状病毒酶联免疫斑点法建立了轮状病毒中和抗体的筛选方法,同时还利用该方法对普通人群血清中中和抗体进行分析和轮状病毒中和抗体的筛选。
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