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目的:通过系统的网络药理学和生物信息学方法结合实验验证探究中药人参作用于三阴性乳腺癌(TNBC)的药理学物质基础和相关作用机制,为人参应用于TNBC提供理论支持及临床应用指导。方法:1.人参有效成分和靶基因:通过TCMSP数据库检索人参有效成分,结合UniProt数据库获取有效成分的靶基因。将人参靶基因进行富集分析,研究其在机体参与的生物学功能过程。2.TNBC微阵列基因芯片和差异表达基因:通过GEO数据库检索TNBC相关的微阵列基因芯片并分析,获取TNBC疾病相关差异表达基因。将差异表达基因构建可视化蛋白质相互作用网络,拓扑分析后得出该网络的关键基因。3.人参有效成分与TNBC靶点结合:通过分子对接技术,将人参有效成分与TNBC差异表达关键基因进行分子对接打分,获取结合度最高人参有效成分,进行下一步的细胞实验验证。4.人参有效成分作用于人乳腺癌细胞系MDA-MB-468和MDA-MB-231:用CCK8法观察不同浓度人参有效成分对人乳腺癌细胞系MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞活性的影响。细胞迁移和侵袭实验检测不同浓度的人参有效成分作用于MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞的迁移能力和侵袭能力的改变。实时荧光定量PCR实验检测不同浓度的人参有效成分处理乳腺癌MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞中关键基因的表达情况。结果:1.通过TCMSP数据库检索得出15种人参有效化学成分,结合UniProt预测有效化学成分的靶基因172个。富集分析发现,这些靶基因参与癌症途径、钙信号通路、cAMP信号通路、PI3K-Akt信号通路、癌症中的转录失调等TNBC相关通路。2.通过GEO数据库筛选出3张TNBC微阵列基因芯片GSE45827,GSE38959和GSE81838进行差异分析后,获取196个差异表达基因。经过拓扑分析显示,MAD2L1、CCNB1、TOP2A、BUB1、CDC6、KIF11、BUB1B、AURKA 为 196 个差异表达基因网络中的8个关键基因。又经通路富集分析发现,BUB1和CCNB1共同富集于细胞周期通路,且与TNBC疾病进程密切相关。其中BUB1可能通过CDH1调节CCNB1,故BUB1和CCNB1为TNBC疾病差异表达的2个关键基因。3.将TNBC的2个关键基因(BUB1、CCNB1)与15种人参活性成分分别进行分子对接模拟,得出2个关键基因与人参皂苷Rh2(G-Rh2)对接模拟最佳,又因BUB1、CCNB1、CDH1三者之间存在调节关系,故下一步行细胞实验验证。4.CCK8实验结果表明,G-Rh2能够抑制乳腺癌MDA-MB-468和MDA-MB-231细胞的增殖,并且有时间和浓度依赖性(P<0.05);迁移和侵袭实验表明G-Rh2明显抑制了细胞的迁移和侵袭能力,差异有统计学意义(P<0.01);实时荧光定量PCR实验结果发现,随着G-Rh2浓度的增加,可以抑制BUB1、CCNB1和CDH1在MDA-MB-468和MDA-MB-231 中的表达(P<0.01)。结论:本研究提示G-Rh2作为中药人参作用于TNBC的关键有效成分,能够抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-468和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭。G-Rh2可能通过干预BUB1、CDH1基因的细胞周期环节直接或间接影响CCNB1的表达,最终实现对TNBC肿瘤细胞的调控。这一结果能够为人参治疗TNBC的进一步研究提供分子基础,也表明利用网络药理学连接大规模目标数据作为发现中药成分干扰疾病机制的可行性。