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目的： 建立反相高效液相色潽法(Reversed-PhaseHigh-Performance Liquid Chromatography,RP-HPLC)测定急性淋巴细胞白血病(Acute lymphocytic leukemia,ALL)患儿血清甲氨蝶呤浓度，通过测定大剂量甲氨蝶呤给药后44h、48h的血药浓度，探讨不同时间点血药浓度与不良反应之间的关系，研究血药浓度指导四氢叶酸解救的临床意义，为临床制定合理的解救方案提供理论依据。 方法： 使用RP-HPLC法测定大剂量甲氨蝶呤给药后42例患儿的血药浓度。血清经50μL15％高氯酸处理后离心，吸取上清液，微孔滤膜过滤，20μL进样。色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（4.6mm?150mm，5μm）；流动相：甲醇-0.06%磷酸（78:22）；检测波长：306nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃。根据所测得血药浓度，参考中国儿童急性淋巴细胞白血病诊疗建议和中国CCLG-ALL方案，进行四氢叶酸解救，并探讨血药浓度与不良反应的关系。 结果： 根据甲氨蝶呤系列标准血清样品所测得的值，获得相应的标准曲线与回归方程，回归方程为：Y=17.552X-0.8922， r=0.9992（n=7）。甲氨蝶呤在0.125～8μg/mL浓度范围内呈良好线性关系。最低定量下限为0.125μg/ml。低、中、高(0.25μg/mL、1.0μg/mL、7.0μg/mL)三个浓度的标准血清样品的日内RSD为1.56-3.41%；日间RSD为1.87-3.79%；其日内和日间RSD均小于15%，准确度在85%-115%范围内。表明该方法的精密度高，重现性好。低、中、高三个浓度的标准血清样品的提取回收率分别为71.87%、75.15%、76.23%，均在50%~80%之间，结果令人满意。各条件的稳定性试验RSD均小于15%，表明甲氨蝶呤血清样品在室温(24h内)、冰冻和冻融条件下稳定性较好。通过本文所建立的实验方法，测得42例急性淋巴细胞白血病患儿在44h和48h的甲氨蝶呤平均血清浓度分别为0.48±0.36μg/mL和0.38±0.26μg/mL。从统计结果看， C44h＞0.5μmol/L和C44h≤0.5μmol/L两组不良反应发生率有明显差异。经Kaplan-Meier统计结果发现，C44h＞0.5μmol/L组血药浓度降低至安全阈值所需时间明显长于C44h≤0.5μmol/L组。 结论： 本研究建立的血药浓度测定方法所需样本量少，色谱条件稳定，操作简单、便捷，可充分应用于ALL患儿甲氨蝶呤血药浓度监测需求。C44h＞0.5μmol/L有推测MTX排泄延迟的作用，有利于及时调整四氢叶酸解救方案。