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副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）是猪上呼吸道常驻菌,通常在机体免疫能力低下时发病,该菌血清型众多,还有不同程度的耐药性,不同地区血清型和耐药谱差异较大。现阶段预防HPS多用灭活苗,但其适用地区较为局限,虽已出现多价联苗,但效果有限仍不能有效阻止该病的发生。近年来,有关益生菌的益生功能逐渐被开发,在临床上对疾病的预防效果显著,由此给了我们启示,在防治HPS病的过程中,是否可以借助于益生菌通过日常饲养的改良提高机体的免疫能力,从而抑制HPS病的发生。本研究就是寻找可抑制HPS生长繁殖并且提高机体免疫能力的益生菌,为HPS病的临床防治及生猪养殖业的快速发展提供科学依据,具有重要的现实意义及应用价值。实验一:首先从可能含有益生菌的食品、饲料及环境中分离益生菌,分离纯化之后对菌液采取4种不同处理方式,再利用琼脂扩散抑菌实验、纸片法抑菌实验以及生长抑制试验筛选能够有效抑制HPS生长的益生菌菌株,并进行鉴定。结果显示:1.利用MRS、TSB、TSA等培养基分离出多株益生菌,筛选出3株能够有效抑制HPS生长的益生菌菌株。2.通过对有效菌株进行革兰氏染色、PCR鉴定及测序分析,鉴定这3株益生菌为植物乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种（又称保加利亚乳杆菌）。3.根据数据计算出菌浓度与OD600的关系曲线,作为后续攻毒试验的依据。实验二:将70只KM雌鼠随机分为7组,分别为空白组、PBS对照组、攻毒组、益生菌-1组、益生菌-2组、益生菌-3组及混合益生菌组,用益生菌给小鼠灌胃,21d后以5型HPS攻毒,并检测T淋巴细胞亚群、IgA及sIgA的含量等各项指标。结果显示:1.经临床及组织病理学检查发现,在等量HPS攻毒的情况下,益生菌可以为小鼠提供一定程度的保护作用,减轻HPS对KM小鼠脏器的病理损伤。2.应用益生菌后CD4+/CD8+比值与攻毒组差异不显著（P>0.05）,但与空白组和PBS对照组差异也不显著（P>0.05）,说明益生菌对维持机体的细胞免疫功能有一定效果,从而抵御HPS的致病作用。3.各益生菌组与攻毒组比外周血单核细胞的百分比均显著或极显著降低（P<0.05或P<0.01）,同时益生菌-1组和益生菌-3组中性粒细胞的百分比亦极显著降低（P<0.01）,二者均更接近于对照组。4.各益生菌组的sIgA含量均有所升高,其中益生菌-1组sIgA含量较攻毒组和对照组显著或极显著升高（P<0.05或P<0.01）,说明益生菌-1诱导粘膜免疫效果最好,能够为机体建立粘膜免疫屏障以防止HPS的侵袭。本研究结果说明益生菌对HPS感染致病有一定预防作用,其部分机理可能是通过提高细胞免疫和粘膜免疫的的水平来实现的。