【摘 要】
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电化学技术具有高灵敏度、高选择性以及低成本的特点，在DNA、蛋白质等生物大分子的电化学分析等方面已广泛使用，在生命科学研究中已成为强有力的工具。在本文中，我们利用电化学
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电化学技术具有高灵敏度、高选择性以及低成本的特点，在DNA、蛋白质等生物大分子的电化学分析等方面已广泛使用，在生命科学研究中已成为强有力的工具。在本文中，我们利用电化学手段，研究了多肽和核酸的磷酸化，建立了检测磷酸激酶活性和磷酸化多肽的体系。
1.多核苷酸激酶活性电化学检测新方法的研究在生物体内，核酸往往会因为离子射线、抗肿瘤生物素以及拓扑异构酶抑制剂等的作用造成核酸单链异常末端，无法被聚合酶、连接酶以及一些外切酶识别。核酸磷酸化过程能够修复核酸的异常末端。这一过程依赖于多核苷酸激酶(PNK)的催化作用，T4多核苷酸激酶就是多核苷酸激酶家族中一员。在本章中，我们建立了一种利用了二茂铁标记的电化学探针和连接酶检测T4多核苷酸激酶活性的电化学方法。研究结果表明，电化学信号大小与T4多核苷酸激酶活性，在0.1 U/ml到10 U/ml的之间具有线性关系。该研究不仅建立了一个检测T4多核苷酸激酶活性的新方法，而且有可能发展成为研究DNA修复或者进行药物筛选的平台。
2.磷酸化多肽电化学检测新方法的研究蛋白质和多肽磷酸化是最常见、最重要的一种蛋白质翻译后修饰方式，它参与和调控生物体内的许多生命活动。在本章中，我们建立了非探针标记与电化学探针标记两种磷酸化多肽电化学检测体系，两类体系均基于金属离子螯合物修饰电极对磷酸化多肽的特异性结合作用。其中，非探针检测体系采用铁氰化钾电对作为电化学指示剂，而电化学探针标记的体系则采用磷酸化多肽上修饰的二茂铁以获得电化学响应信号。研究结果表明，两种体系均能够很好地识别磷酸化多肽，并发展成为灵敏、快速的磷酸化多肽的检测方法，并且为研究蛋白质磷酸化以及检测蛋白激酶的活性提供很好的技术手段。
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