【摘 要】
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目的:研究兔骨髓单个核细胞(Bone Marrow mononuclear cells,BM-MNCs)体内外分化为心肌样细胞的可行性及条件;了解缺血心肌中移植自体骨髓单个核細胞改善心功能的可行性及可
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目的:研究兔骨髓单个核细胞(Bone Marrow mononuclear cells,BM-MNCs)体内外分化为心肌样细胞的可行性及条件;了解缺血心肌中移植自体骨髓单个核細胞改善心功能的可行性及可能机制;观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对骨髓单个核细胞自体移植治疗急性心肌梗死的影响.方法:体外部分于无菌条件下骨穿抽取兔股骨骨髓分离单个核细胞接种培养,于培养第3d加入诱导剂5-氮胞苷(5-azacytiding,5-aza)10μmol/L作用24h,培养观察14d,采用免疫细胞化学方法检测被诱导细胞心肌肌钙蛋白T和α-肌动蛋白的表达,未加5-aza诱导组设为对照;体内部分将5月龄健康日本大耳白兔雄兔26只,随机分为4组:①急性心肌梗死未治疗组(AMI,n=7);②骨髓单个核細胞移植组(BM-MNCs,n=7);③加bFGF的骨髓单个核細胞移植组(bFGF+BM-MNCs,n=7);④假手术组(sham operated,SO,n=5),只穿线不结扎.结扎兔左前降支制作急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)模型,骨穿抽取股骨骨髓2ml,分离培养扩增骨髓单个核细胞,加5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Bromodeoxyuridine,BrdU)进行标记.AMI术后14d进行心肌梗死瘢痕边缘处移植,实验组注射BM-MNCs或BM-MNCs+bFGF,对照组注射等量无血清培养基,假手术组只开胸不注射.AMI术后3d及移植后28d做超声心动图检测心功能,移植后28d利用左心导管测左室压力变化,随后处死动物取左室移植区域心肌组织作冰冻切片,进行BrdU、心肌特异性肌钙蛋白T(Troponin T)、连接蛋白43(connexin-43)、Ⅷ因子相关抗原的免疫荧光染色,以鉴定植入细胞、心肌特异性蛋白和计算各组毛细血管密度.结论:兔骨髓单个核细胞在5-氮胞苷诱导下可体外分化为心肌样细胞.缺血心肌内注射骨髓单个核细胞可在适宜的组织微环境中转化为心肌细胞,促进血管增生,修复梗死心肌,挽救频死心肌,减轻左室重构,改善心功能.同时心肌内注射bFGF能促进血管新生,增强骨髓单个核细胞自体移植改善心功能的疗效.
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