【摘 要】
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环加氧酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)是体内催化产生前列腺素(PGs)等炎症活性物质的关键酶。作为一种诱导型合酶，COX-2可被细胞因子、生长因子、有丝分裂原等多种刺激因素诱导
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环加氧酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)是体内催化产生前列腺素(PGs)等炎症活性物质的关键酶。作为一种诱导型合酶，COX-2可被细胞因子、生长因子、有丝分裂原等多种刺激因素诱导表达。研究已证实，COX-2的异常高表达与炎症、肿瘤、心血管疾病以及糖尿病等多种疾病的发生发展密切相关。
本实验室在前期工作中发现，小鼠COX-2启动子区-655/-632位置上存在着一个转录抑制元件，并且质谱鉴定提示与该元件相结合的其中一种DNA结合蛋白为Nono (non-POU-domain-containing，octamer-bindillg protein)。Nono是一种功能复杂的核蛋白，参与细胞核内RMA加工、基因的转录调控、DNA重组配对等多个核事件过程。为了在前期电泳迁移率改变实验的基础上，进一步验证Nono蛋白确实与此抑制性序列结合，本课题拟在大肠杆菌中表达Nono蛋白，作为抗原免疫小鼠制备Nono的多克隆抗体，用于超迁移实验。
结果显示，pET-28a(+)-Nono重组表达质粒构建成功，在大肠杆菌中诱导表达出的His-Nono融合蛋白达到了作为抗原免疫小鼠的要求。最终获得了滴度较高，特异性较好的抗Nono抗血清，纯化出的抗Nono多克隆抗体不仅用于超迁移实验，也为以后进一步研究Nono蛋白在COX-2转录调控方面所起的作用打下基础。
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