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目的:探讨泸州地区耐多药大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)产质粒AmpCβ-内酰胺酶(AmpC酶)现状及其基因型分布,分析产AmpC酶大肠埃希菌对常用抗生素的耐药特点,为临床合理应用抗生素和防止耐药基因的广泛传播提供理论依据。 方法:1.初筛试验:根据临床实验室标准化机构(Clinical labora-tory Standards Insitute, CLSI)推荐的纸片扩散法(kerby-Bauer纸片扩散法)检测71株大肠埃希菌对头孢西丁的耐药性,即抑菌环≤18mm为可疑产AmpC酶阳性菌株。2.三维试验:根据Coudron等推荐的头孢西丁三维试验方法,通过大肠埃希菌的β-内酰胺酶提取物能否水解头孢西丁(FOX)来判定其是否产 AmpC酶,从而检测出产AmpC酶菌株。3.纸片扩散法(Kerby-Bauer法,K-B法):测定本地临床分离71株大肠埃希菌对头孢噻肟(CTX)、头孢吡肟(FEP)、头孢西丁(FOX)、氨曲南(ATM)、亚胺培南(IPM)、庆大霉素(GEN)、阿米卡星(AMK)、链霉素(S)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LEV)共10种抗菌药物的耐药性并筛选出产 AmpC酶菌株菌株。4.PCR技术:检测三维实验阳性菌株的AmpC酶基因。参考文献设计6对特异性引物,采用普通质粒小提试剂盒提取大肠埃希菌质粒DNA用于PCR反应模板。各标本分别使用六对设计好的引物扩增,阳性扩增片段长度分别为520bp、462bp、405bp、346bp、302bp、190bp。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,紫外线检测仪观察结果。5.基因测序:分别取质粒 AmpC酶基因扩增阳性的菌株的PCR扩增产物用核酸定量仪测得 DNA浓度>300ug/ml,并送至上海生工生物技术公司进行基因测序。 结果:1.头孢西丁三维试验:在71株大肠埃希菌中粗筛阳性产AmpC酶菌株共11株,通过头孢西丁三维试验分离出产AmpC酶的菌株8株,占总菌株数11.27％。2.药敏结果:(1)71株大肠埃希菌药敏结果显示对亚胺培南全敏感,阿米卡星,头孢西丁,氨曲南,头孢吡肟,敏感率较高均大于59.15％,较低的是头孢噻肟,链霉素,庆大霉素,环丙沙星,左氧氟沙星。(2)以耐多药菌株24株(33.80％)和双耐菌株35株为主(33.80％),其中耐多药模式的表型以GEN+CTX+LEV(16株,22.54％)为主。3.三维实验阳性菌株(产AmpC酶菌株)对多种常用抗生素的耐药率明显高于非产AmpC酶菌株(χ2检验,P<0.05)。4.PCR检测AmpC酶基因情况:对三维实验阳性的8株菌株行PCR扩增,2株呈阳性,测序结果显示2株均为DHA-1型。 结论:1.泸州地区临床分离的大肠埃希菌中产ESBLs情况较严重,产AmpC酶的情况相对较少,并都呈现出多重耐药的现象。2.本地区的大肠埃希菌质粒介导的AmpC酶的基因型以DHA-1为主,且产AmpC酶菌株的耐药率明显高于非产AmpC酶菌株。3.本地区大肠埃希菌检测出2株疑似为SSBLs,其基因型组合均为DHA-1型AmpC酶和CTX-M型的ESBLs。