【摘 要】
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目的:比较腺病毒和慢病毒载体介导EGFP/BMP-2转染体外培养兔骨髓间充质干细胞的转导效率、持续时间及外源基因表达差异。方法:将第5代兔骨髓间充质干细胞分3组培养,A组以腺病
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目的:比较腺病毒和慢病毒载体介导EGFP/BMP-2转染体外培养兔骨髓间充质干细胞的转导效率、持续时间及外源基因表达差异。方法:将第5代兔骨髓间充质干细胞分3组培养,A组以腺病毒载体介导EGFP/BMP-2(Ad-EGFP/BMP-2)转染细胞,B组以慢病毒载体介导EGFP/BMP-2(Lenti-EGFP/BMP-2)转染细胞,C组为未转染对照组以实验组相同的试剂与条件下培养。转染24h、48h、72h、1周、3周,检测EGFP基因表达;转染72h后,免疫组织化学观察细胞BMP-2的表达;转染后72h、1周、3周,Western blot检测BMP-2的表达。结果:(1)转染24h后,A、B组可见EGFP表达,A组明显强于B组;转染48 h后,A、B组荧光进一步增强;转染72 h后,A组荧光强度近高峰,B组荧光持续增强。转染1周后,A组荧光强度开始下降,B组荧光强度仍然增强。转染3周后,A组荧光强度明显下降甚至消失,B组荧光强度有所下降,但仍然保持一定的表达。C组在各时间点均无EGFP表达;(2)A、B组胞浆均呈BMP-2阳性表达,C组呈阴性表达;(3)转染72h后,A组表达量强于B组;转染1周后,A组表达下降,B组表达增强并强于A组;转染3周后,A组表达微弱,B组持续表达且明显强于A组。结论:相对腺病毒载体,慢病毒载体介导EGFP/BMP-2基因转染兔BMSCs在表达持续时间上具有一定的优势。
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