黑龙江省部分地区牛贾第虫的感染情况及分离株的分子鉴定

• 作 者: 张小云
• 机 构: 哈尔滨医科大学
• 出 处: 哈尔滨医科大学
• 发表日期: 2012年期
• 关键词: 贾第虫病 牛 病原感染 分离株 集聚体基因型

目的：研究黑龙江省牛贾第虫的感染情况，对牛贾第虫分离株进行分子鉴定，明确本地区牛贾第虫的基因型和亚型并对其基因变异进行分析，科学评估贾第虫病人兽共患的可能性及风险程度。　　方法：于黑龙江省4个地区的7个牧场用直肠采样的方法共收集了814份牛粪便样本(605份奶牛样本和209份肉牛样本)，并记录了被采集的牛是否有腹泻症状。用卢戈氏碘液染色法对收集的粪便样本进行涂片染色，在显微镜下检查贾第虫包囊。对未断乳的犊牛粪便样本先用福尔马林-乙酸乙酯沉淀法除去脂肪后，再用卢戈氏碘液染色法涂片后镜检贾第虫包囊。提取贾第虫阳性样本基因组的DNA，对阳性样本TPI基因进行巢式PCR扩增，通过序列分析确定牛贾第虫的基因型和亚型，并进行同源性分析。　　结果：黑龙江省牛贾第虫的感染率为5.2％，7个牧场的感染率分别为7.8％，11.2％，2.9％，4.0％，3.6％，0.7％和7.6％。对42份贾第虫阳性样本的PCR产物进行测序，由于其中一份是混合感染，共得到43条基因序列。将其与参考序列比对后共鉴定为3个基因型：集聚体A、B和E，三者所占比例分别为2.3％、41.9％和55.8％。集聚体A和B分别在1个和5个牧场中可见，集聚体E在7个牧场均有分布。集聚体类型与腹泻之间没有明显的相关性。集聚体B和E在TPI位点上显示了高度的多态性。集聚体B分为9个亚型(命名为BⅠ到BⅨ)，其中BⅠ占33.3％，为主要亚型。它与先前本地区报道的兔源(HQ397719)和水源(HQ603781)贾第虫分离株完全相同，其余8个为新亚型。集聚体E分为6个亚型(命名为EⅠ到EⅥ)，其中EⅠ为主要亚型，占37.5％。EⅠ、EⅡ和EⅢ分别和先前美国与日本报道的牛贾第虫基因亚型相同，其余3个为新亚型。　　结论：黑龙江省牛贾第虫的感染率较低，对其进行分子鉴定共得到集聚体A、B和E3个基因型，其中集聚体E占得比例最大，对农场的其他易感动物健康有严重的威胁。集聚体A和B为人兽共患基因型，对当地居民健康构成威胁，具有公共卫生意义。在本研究中集聚体B和E都显示了高度的基因内部多态性。其中有3个集聚体E亚型和8个集聚体B亚型为新亚型。