蓬子莱总黄酮抗氧化损伤作用的机理研究

• 作 者: 史灵恩
• 机 构: 哈尔滨医科大学
• 出 处: 哈尔滨医科大学
• 发表日期: 2012年期
• 关键词: 蓬子菜总黄酮 人脐静脉内皮细胞 过氧化氢损伤 内皮素-1 降钙素基因相关肽 药理作用

目的：从蓬子菜全草中提取总黄酮成分，对蓬子菜总黄酮(FGVL)(主要成分是香叶木苷)进行鉴定，并探讨对体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelical Cells，HUVECs)的保护及损伤修复作用及机理研究。　　方法：采用较为成熟的层析分离手段，大孔吸附树脂柱层析、聚丙烯酰胺柱层析、葡聚糖凝胶柱层析及正反相硅胶柱层析等，从蓬子菜干燥全草的70％乙醇提取物中分离得到总黄酮；用台盼兰染色，细胞计数法测定蓬子菜总黄酮对HUVECs生长的影响；用MTT法，测定蓬子菜总黄酮对HUVECs的增殖抑制率；用过氧化氢(H2O2)建立HUVECs损伤及凋亡的模型；用吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色方法观察HUVECs的凋亡：用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞分泌的内皮素-1(Endothelin-1，ET-1)及降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide，CGRP)，探讨蓬子菜总黄酮抗氧化损伤作用的机理。　　结果：采用成熟的工艺提纯流程，从蓬子菜全草的70％乙醇提取物中提取得到总黄酮(香叶木苷)，并鉴定提取物为目标化合物，纯度为75％：细胞计数法及MTT法显示：蓬子菜总黄酮在高剂量(400μg/ml)对HUVECs具有明显的细胞毒性作用，72小时细胞几乎全部死亡，而中等剂量(100-200μg/ml)对HUVECs有不同程度的抑制生长的作用，且均呈时间、浓度依赖性。但是在低剂量(12.5-50μg/ml)有轻度促进细胞生长的作用。H2O2在低剂量100μmol/L作用4h可造成HUVECs损伤，而当H2O2的浓度达到400mol/L，作用4h时，可明显诱导细胞凋亡。为此，奄损伤实验中选择浓度为100μmol/L损伤4h后，再加入不同浓度蓬子菜总黄酮，来探讨蓬子菜总黄酮的损伤修复作用。在抗凋亡实验中，首先，在HUVECs中加入不同浓度的蓬子菜总黄酮作用24h，然后加入终浓度400μmol/ml的H2O2作用4h，检测受损细胞的凋亡率。AO/EB染色结果显示，与对照组比较，模型组可见大量凋亡细胞。在预先加入蓬子菜总黄酮的各个剂量组，细胞凋亡率均明显低与模型组，且随着浓度的增高凋亡率降低。ELISA结果表明，与对照组相比，模型组ET-1的分泌水平明显提高(P<0.05)，CGRP的分泌水平显著降低(P<0.01)，ET-1/CGRP比值明显升高；与模型组相比，低剂量蓬子菜总黄酮处理后，ET-1的分泌水平无明显变化，CGRP的分泌水平显著增加，而随着蓬子菜总黄酮浓度的增高，ET-1的水平明显降低，CGRP水平不同程度的增加，ET-1/CGRP比值趋于正常。　　结论：蓬子菜总黄酮对氧化损伤的HUVECs具有损伤修复和抗凋亡作用，其机制与调节ET-1和CGRP的分泌有关。